[发明专利]水稻白叶枯病菌小种划分方法

摘要

利用已知抗病基因的6个近等基因系材料对水稻白叶枯病菌的小种进行划分和鉴别。在水稻孕穗期，以浓度约为3×10⁸cfu/ml的菌悬液对水稻主茎平展剑叶进行剪叶法接种，接种2周和3周后分别测量病斑长度和病叶全叶长度，以3周后调查的病斑长度小于接种叶长的四分之一为抗病(R)，反之大于等于接种叶长的四分之一为感病(S)。根据病原菌分别在水稻品种IRBB5、IRBB13、IRBB3、IRBB14、IRBB2和IR24上的互作结果，对应9个小种R1－R9的互作模式，将白叶枯菌株对应划分为相应的小种。

主权项

1、水稻白叶枯病菌小种的划分方法，包括：1)水稻鉴别品种的准备：已知抗病基因的6个近等基因系材料，见表1，将参试水稻品种以规定的次序移栽到每个划定的小区，每个品种栽插1行，单株栽插，株行距为25×20cm，根据当地常规的种植方法进行浸种、育秧、移栽以及管理；表1.参试水稻鉴别品种及其所包含的抗性基因 水稻品种 抗性基因 水稻品种 抗性基因 IRBB2 IRBB3 IRBB5 Xa2 Xa3 xa5 IRBB13 IRBB14 IR24 xa13 Xa14 轮回亲本2)参试菌株的准备：取出冻干保存的原始菌株，移植两代后在移植两代后在汕优63上预接种，从中选出有活力的菌株作为参试菌株。接种前两天取出参试菌株，在NA斜面上划线，28度生长48小时后接种。NA培养基配方：牛肉浸膏3g，酵母提取物1g，多聚蛋白胨5g，蔗糖10g，琼脂17g，加水定容至1000mL，调pH至7.0；3)接种：接种前，以无菌水洗脱菌落，悬浮均匀，调整菌悬液浓度约为3×108cfu/ml。用预先灭菌处理的、型号一致的平口剪刀沾取菌悬液(沾菌悬液时应张开剪刀，以使刀刃上能沾到菌悬液)，选取主茎剑叶平展叶片，剪刀平置，刀尖稍向上，剪去叶尖2-3cm，每个水稻品种接种10片叶。接种过程中，每接种一个菌株要换一把处理过的剪刀；4)病情调查：接种2周和3周后分别测量病斑长度和该叶片的全长，每个菌株测量10张叶片。以3周后调查的病斑长度小于接种叶长的四分之一为抗病，反之大于等于接种叶长的四分之一为感病；5)小种划分：用含不同抗病基因的水稻近等基因系品种IRBB5、IRBB13、IRBB3、IRBB14、IRBB2和IR24作为鉴别品种，根据病原菌菌株与这些鉴别品种的互作结果，对应9个小种R1-R9的互作模式，R1：抗抗抗抗抗抗；R2：抗抗抗抗抗感；R3：抗抗抗抗感感；R4：抗抗抗感感感；R5：抗抗感感感感；R6：抗感抗抗抗感；R7：抗感感抗抗感；R8：抗感感感感感；R9：感感感感感感，将白叶枯菌株对应划分为相应的小种。