[发明专利]一种R－藻红蛋白的快速分离纯化方法

摘要

一种R－藻红蛋白的快速分离纯化方法，属于海洋红藻分离纯化技术领域。本发明以海洋红藻为材料，应用经冻溶和低离子强度溶涨快速提取R－藻红蛋白，然后经硫酸铵沉淀进行初步纯化，最后根据R－藻红蛋白在较宽的pH范围内保持稳定的特性，利用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析技术，用恒定的离子强度、pH梯度的缓冲液进行洗脱，一步法可以得到高纯度的R－藻红蛋白。本方法省去了传统的应用分子筛层析结合离子强度洗脱的离子交换层析的复杂分离纯化程序，克服了难于规模化快速制备的难题，操作简便，得率高，容易大量制备并且大大降低了RPE的制备成本，从而为将RPE应用于超灵敏的生物医学检测奠定了基础。

主权项

1.R-藻红蛋白的快速高效分离纯化方法，步骤如下：(1)原料为海洋红藻，选自多管藻或三叉仙菜；(2)R-藻红蛋白的提取，冷冻保存的红藻藻体10～12g，按体积比1∶1加入0.02/L磷酸缓冲液pH6.8～7.0，20～25℃下，融化2～3h，纱布过滤，滤液在4℃下，8000rpm～10000rpm离心10min～15min，上清液即为R-藻红蛋白的粗体液；(3)R-藻红蛋白的初步纯化：应用硫酸铵沉淀法，将R-藻红蛋白的粗体液中的R-藻红蛋白从溶液中沉淀出来，向上述步骤(2)得到的R-藻红蛋白的粗体液中加入固体硫酸铵，离心收集沉淀，再用20mM磷酸缓冲液pH6.8～7.0溶解并透析，除去硫酸铵；(4)一步法制备高纯度R-藻红蛋白：利用离子交换层析技术，用具有恒定的离子强度、pH梯度的缓冲液进行洗脱，得到高纯度的R-藻红蛋白。