[发明专利]重组嵌合分子Cb1－Grb7(SH2）－RING真核表达质粒及抗肿瘤基因药物用途

摘要

本发明公开了重组嵌合Cb1泛素连接酶Cb1－Grb7(SH2)－RING真核表达载体的构建方法，所构建表达质粒pcDNA3.1(+)－Cb1－Grb7(SH2)－RING能够作为抗EGFR或HER2阳性肿瘤的基因药物。经实验证明：重组嵌合分子Cb1－Grb7(SH2)－RING真核表达质粒转染EGFR阳性肺癌细胞A549或HER2阳性乳腺癌细胞系SK－BR－3后，通过促进EGFR或HER2下调，有效地抑制了与EGFR或HER2过度活化有关的细胞增殖，因而具有抗EGFR或HER2阳性肿瘤的用途。

主权项

1.重组嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒的构建方法，其特征在于：首先将BamH I和EcoRv引入Cb1N端编码基因SH2的两端，构建pcDNA3.1(+)-Cb1N(BamH I+EcoR V)；将其克隆入pGEM-T easy载体进行测序，测序正确后利用KpnI/XhoI酶切将其插入到pcDNA3.1(+)真核表达载体的KpnI/XhoI酶切位点之间，即得到pcDNA3.1(+)-Cb1N(BamH I+EcoRV)；再以SK-BR-3细胞的cDNA为模板，设计引物扩增得到Grb7 SH2基因片段，克隆到pGEM-T easy载体中，酶切鉴定及测序证实序列正确后，以BamH I和EcoR v双酶切将Grb7 SH2基因片段切出，插入到pcDNA3.1(+)-Cb1N(BamH I+EcoR V)载体的BamH I/EcoR V酶切位点之间；经BamH I和EcoRv双酶切鉴定后，对获得预期大小的插入片段的载体再进行测序证实，命名为pcDNA3.1(+)-Cb1-Grb7(SH2)-RING，即为重组嵌合Cb1泛素连接酶Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒。