[发明专利]一种用于活性导向筛选抗AIDS天然产物的方法

摘要

本发明涉及HIV－1逆转录酶抑制剂的筛选方法，依据HIV－1逆转录酶以单一碱基RNA为模板催化DNA合成，利用biotin－dUTP和digoxigenin－dUTP随机掺入DNA中，形成digoxigenin－biotin双标记的DNA；再通过抗digoxigenin抗体特异性捕获DNA，利用荧光标记链亲和素与biotin标记DNA的特异性结合进行检测，根据荧光强弱可知合成DNA中生物素的量，从而推算HIV－1逆转录酶的活性。本发明克服了以往方法中生物素干扰造成假阳性的难题，对天然产物中的HIV－1逆转录酶抑制活性进行高效、灵敏检测，方法简便，抗干扰能力强，在抗AIDS天然产物的筛选中具有广泛应用前景。

主权项

1.一种用于活性导向筛选抗AIDS天然产物的方法，其特征在于：以HIV-1逆转录酶抑制剂抑制活性的检测来对天然产物粗提物进行筛选；具体为，在逆转录反应体系中加入天然产物粗提物，逆转录反应体系包括HIV-1逆转录酶、单一碱基组成的RNA及引物、biotin-dUTP、digoxigenin-dUTP、dTTP，HIV-1逆转录酶以单一碱基组成的RNA为模板催化DNA合成，biotin-dUTP和digoxigenin-dUTP随机掺入DNA，形成digoxigenin-biotin双标记的DNA；再通过digoxigenin标记DNA与抗digoxigenin抗体的特异性结合进行捕获，通过biotin标记DNA与荧光标记链亲和素的特异性结合进行检测，HIV-1逆转录酶活性通过单位时间内掺入的biotin-dUTP体现，活性越高，单位时间内掺入的biotin-dUTP越多。