[发明专利]一种耐热酪氨酸蛋白磷酸酶及其分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种从金龟子绿僵菌菌株CQMa102中诱导产生的耐热酪氨酸蛋白磷酸酶及其分离纯化方法。它是采用特殊诱导培养基诱导培养该金龟子绿僵菌以形成所述的酶，并加以分离纯化制得。制得的酶蛋白是糖蛋白，能特异性水解蛋白中酪氨酸上的磷酸根基团，具有活性高、底物专一性高的特点，分子量82.5kDa，等电点9.5，热稳定性好，在70℃条件下能4h保持酶活性不变；N－乙基马来酰亚氨、钼酸盐、钒酸盐和二价锌离子等都能特异性抑制该酶的活性，而冈田酸和氟化物对其酶活性没有明显影响，可以作为生化试剂。

主权项

1、一种耐热酪氨酸蛋白磷酸酶，它能在pH5.5，75℃条件下特异性水解蛋白中酪氨酸上的磷酸根基团，并具有如下的物理化学特性：(1)分子量：在十二烷基磺酸钠变性聚丙烯酰胺凝胶电泳上约为82.5kDa；(2)等电点：在5％的天然聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳上约为9.5；(3)最适反应温度和最佳反应pH：在酪氨酸上含有磷酸基团的所有蛋白都是该酶蛋白的底物，其最适反应温度为75±1℃，最佳pH为5.5±0.5；(4)热稳定性：此酶蛋白在70℃温育240min对酶活性没有明显影响，当孵育温度为80℃时，随着孵育时间延长酶活性直线下降，当温度超过90℃时，酶活性迅速丧失；(5)抑制剂：N-乙基马来酰亚氨、钼酸根、钒酸盐和二价锌离子都是此酶蛋白的特异抑制剂；(6)酶动力学特性：此酶蛋白的米氏常数Km为1.273±0.083mM，最大酶促反应速度Vmax为8.72±0.12μmol.min-1.mg-1；其中所述酶是从绿僵菌属(Metarhizium anisopliae)金龟子绿僵菌CQMa102(Metarhizium anisopliae var.acridum CQMa102)，保藏编号为CGMCC No.0877中提取制得。