[发明专利]眼镜蛇毒神经毒素和细胞毒素的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种眼镜蛇蛇毒神经毒素和细胞毒素的分离纯化方法，可同时分离眼镜蛇毒神经毒素和细胞毒素，提高了眼镜蛇毒的综合利用效率。本发明先使用丙酮处理眼镜蛇蛇毒原液，以除去蛇毒原液中的脂溶性成分，以酸调节蛇毒丙酮粉水溶液的pH，离心除去蛇毒中的中酸性蛋白和多肽，再以PAA特异吸附并沉淀蛇毒中的碱性蛋白和碱性多肽，离心分离PAA－碱性蛋白/多肽复合物，除去水溶性成分；利用pH变化使PAA－碱性蛋白/多肽解吸附，用氯化钙除去PAA；以Sephadex G－50(超细颗粒)凝胶柱分离纯化眼镜蛇毒神经毒素和细胞毒素，产品含盐量低，可直接冷冻干燥。

主权项

1、眼镜蛇毒神经毒素和细胞毒素的分离纯化方法，其特征在于以下步骤：(1)按重量份1份眼镜蛇毒原液使用10份丙酮研磨、洗涤，操作时，先取适量丙酮研磨眼镜蛇毒原液成匀浆，以滤纸过滤匀浆，再用剩余丙酮洗涤，室温放置使丙酮挥发，即得眼镜蛇毒丙酮粉；(2)眼镜蛇毒丙酮粉按1∶10(W/V)溶解于蒸馏水中，用50％的乙酸溶液调节pH至4.0～5.0，10000rpm 4℃低温离心5～10min，取上清液；(3)按上清液体积计，加入25％的聚丙烯酸(polyacrylic acid，PAA)至终浓度为3～5％(W/V)，记录PAA加入量，4℃放置30～50min，2000rpm 4℃低温离心3～5min，取沉淀溶解于适量蒸馏水中，用0.5mol/L碳酸钠溶液调pH至9.5～10.0，加氯化钠至终浓度为4～5％(W/V)，以已加入的PAA∶氯化钙溶液为1∶35(W/V)加入20％的氯化钙溶液并混匀，室温放置30min，以盐酸调节pH至4.0～5.0，室温放置30～50min，10000rpm 4℃低温离心5～10min，取上清液；(4)上清液用超细颗粒Sephadex G-50凝胶柱分离，以5～10mmol/L pH 7.0～7.5含0.2～0.3mol/L氯化钠的磷酸盐缓冲液洗脱，第一个洗脱主峰为神经毒素，第二个洗脱主峰为细胞毒素，收集各级分溶液冻干，即分别为眼镜蛇毒神经毒素和细胞毒素。