[发明专利]鳞翅目害虫的高毒力核型多角体病毒构建技术

摘要

鳞翅目害虫的高毒力核型多角体病毒构建技术属于生物技术领域，涉及一种利用双链RNA干涉等现代分子生物学手段，改造野生核型多角体病毒(NPV)，构建鳞翅目害虫的高毒力NPV的技术。本发明的高毒力核型多角体病毒的构建技术包括以下步骤：①尺蠖等鳞翅目害虫几丁质合成酶(CS)基因保守序列的克隆；②鳞翅目害虫CS基因dsRNAi中间载体构建；③包含CS双链干涉序列的NPV转移载体构建；④包含CS双链干涉序列的NPV重组，并通过PCR等方法对重组NPV进行验证。以野生NPV病毒为对照，对重组NPV进行杀虫能力评价和筛选，获得高毒力的重组NPV。改造后的新型NPV对鳞翅目害虫具有更快的扩散和再侵染速度，更高毒力和更好防治效果。

主权项

1、鳞翅目害虫的高毒力核型多角体病毒构建技术，其特征在于如下步骤：(1)鳞翅目害虫几丁质合成酶(CS)基因保守序列经克隆纯化后连接到pUcm-T载体并转化大肠杆菌，经抗性筛选获包含CS保守序列的pUCm-T载体(pUCm-T-CS)；(2)通过酶切和连接将CS插入双链干涉序列(dsRNAi)中间载体，获包含CS双链干涉序列的载体pFGC5941-CS-intron-CSr，经验证后转化大肠杆菌扩增；(3)将pFGC5941-CS-intron-CSr中间载体双酶切后获得的CS-intron-CSr序列插入包含多角体基因(ph)的pFASTBacI-ph质粒，构建pFASTBacI-ph-CS-intron-CSr；(4)将pFASTBacI-ph-CS-intron-CSr转化包含NPV DNA(Bacmid)和帮助质粒的大肠杆菌(DH10Bac)，获包含CS双链干涉序列的重组NPV；(5)将上述重组NPV侵染草地叶蛾细胞株sf9扩增，经筛选获高毒力重组NPV。