[发明专利]梨树病毒杂交检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种梨树病毒杂交检测试剂盒及其检测方法。用于检测梨树上梨环纹花叶、苹果茎沟、梨脉黄的三种病毒，该试剂盒包括预杂交液、杂交液、洗涤溶液Ⅰ、洗涤溶液Ⅱ、缓冲溶液Ⅰ、缓冲溶液Ⅱ、抗体液、缓冲溶液Ⅲ、引物序列、探针序列。该试剂盒配制方法简便，易于产业化生产，针对该试剂盒所提供的杂交检测方法，具有稳定性好、灵敏度高、特异性强、快捷、成本较低、易于操作等优点。可高效地应用于梨病毒种类及分布情况的调查研究及无病毒规范化。

主权项

1、一种梨树病毒杂交检测试剂盒，其特征在于包括：梨环纹花叶病毒探针序列如序列表中的序列(<210>1)所示。苹果茎沟病毒探针序列如序列表中的序列(<210>2)所示。梨脉黄病毒探针序列如序列表中的序列(<210>3)所示。上述探针的用量为；0.005-0.03mg/mL DNA，1#液，预杂交液；含有：50％去离子甲酰胺，5×Denhardt′s，0.1％十二烷基硫酸钠，5×SSC，20mmol/L磷酸钠，0.5mg/mL鲑精DNA，20mL，2#液，杂交液；含有，50％去离子甲酰胺，5×Denhardt′s，0.1％十二烷基硫酸钠，5×SSC，20mmol/L磷酸钠，0.5mg/mL鲑精DNA，20mL并含有0.005-0.030mg/mL DNA探针的预杂交液20mL，3#液，清洗液I#；；含有0.1％十二烷基硫酸钠的2× SSC，40mL，4#液，清洗液II；含有0.1％十二烷基硫酸钠的0.1×SSC，40mL，5#液，缓冲液I#；含有100mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，150mmol/L氯化钠，100mL，6#液，缓冲液II#；含有100mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，150mmol/L氯化钠，3％(w/v)牛血清白蛋白，40mL，7#液，抗体液；含有抗地高辛抗体结合蛋白750U/mL，0.005mL，8#液，含有缓冲液III#；100mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，100mmol/L氯化钠，50mmol/L氯化镁，40mL，9#液，含有氯化氮蓝四唑32.5mg/mL、5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸17 5mg/mL，02mL，10#液，显色液病毒阳性对照(CK+)，0.010mL，11#液，病毒阴性对照(CK-)，0.010mL，杂交膜(4cm×10cm)1张，杂交管(5mL)10支。