[发明专利]一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法有效
| 申请号： | 200510080478.0 | 申请日： | 2005-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN1749274A | 公开（公告）日： | 2006-03-22 |
| 发明（设计）人： | 张春丽 | 申请（专利权）人： | 北京凯因生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/56 | 分类号： | C07K14/56;C07K1/14 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100176北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法，其包括下述步骤：破碎重组人干扰素α2b大肠杆菌工程菌，尿素溶解，Tris－HCl洗涤，盐酸胍裂解，硼酸复性，调pH值，盐溶，疏水柱M 1柱层析，CM－Sepharose柱层析，疏水柱M2柱层析和S－100分子筛层析。本方法减少了纯化步骤，进行纯化过程的集成，使工艺流程顺畅，无迂回，生产配置无瓶颈，为大规模自动化生产的再放大提供了可能。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 干扰素 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种新的重组人干扰素α2b的分离纯化方法，其包括下述步骤：(1)破碎发酵完毕的重组人干扰素α2b大肠杆菌工程菌，离心得沉淀；(2)将沉淀按1∶5-20(重量/体积)比例加入4M尿素/TE溶液，离心得沉淀；(3)将沉淀按1∶5-25(重量/体积)比例加入Tris-HCl溶液，离心得沉淀；(4)将沉淀按1∶2-10(重量/体积)加入8M盐酸胍+DTT裂解液，离心，取上清液，测蛋白含量；(5)将上清液倒入H3BO3溶液中搅拌均匀，稀释后的溶液蛋白含量为0.15-0.08mg/ml，复性，得复性液；(6)向复性液中缓慢滴加6M HCl，调PH2.0-3.0，离心，收集上清液，缓慢滴加6M NaOH(体积/体积)，调PH7.8-8.0；(7)将硫酸铵粉末缓慢加入上清液中，溶解后过滤，取滤液；(8)依次进行疏水柱M1柱层析、CM-Sepharose柱层析、疏水柱M2柱层析和S-100分子筛层析。
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