[发明专利]在大肠杆菌或芽孢杆菌中分泌表达外源基因的表达载体及其构建

摘要

在大肠杆菌或芽孢杆菌中分泌表达外源基因的表达载体及其构建，属基因工程技术领域。本发明的表达载体pBL－WZX含有一个在大肠杆菌或芽孢杆菌中皆具有功能的启动子序列，含有一个在大肠杆菌或芽孢杆菌中皆具有功能的信号肽序列，含有一个供外源基因克隆的多克隆位点，含有一个人工转录终止序列，含有一个可在大肠杆菌或芽孢杆菌中进行克隆选择的遗传标记和含有一个供外源基因在芽孢杆菌的染色体DNA中进行整合和基因拷贝数扩增DNA序列。表达载体pBL－WZX具有引导外源基因转录和翻译并将基因产物分泌到细胞外的能力，在大肠杆菌中介导外源基因分泌表达的水平可达到1mg/mL以上，在芽孢杆菌中介导外源基因分泌表达的水平可达到3.1mg/mL以上。

主权项

1.一种在大肠杆菌或芽孢杆菌中分泌表达外源基因的表达载体pBL-WZX，其核苷酸序列为：agatccattg gtaactgtat ctcagcttga agaagtgaag aagcagagag gctattgaat 60aaatgagtag aaagcgccat atcggcgctt ttcttttgga agaaaatata gggaaaatgg 120tacttgttaa aaattcggaa tatttataca atatcatatg tttcacattg aaaggggagg 180agaatcatga aacaacaaaa acggctttac gcccgattgc tgacgctgtt atttgcgctc 240atcttcttgc tgcctcattc tgcagcagcg gcggcaaatc tagaattcga gctcccgggt 300accatggcat gctaattaga tagagcagag aggacggatt tcctgaagga aatccgtttt 360tttattttgc ccgtcttata agacaaggga aaacgcaagc gcaaagagaa agcaggtagc 420ttgcagtggg cttacatggc gatagctaga ctgggcggtt ttatggacag caagcgaacc 480ggaattgcca gctggggcgc cctctggtaa ggttgggaag ccctgcaaag taaactggat 540ggctttcttg ccgccaagga tctgatggcg caggggatca agatctgatc aagagacagg 600atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg 660ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc 720cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg 780tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt 840tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc tgctattggg 900cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat 960catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca 1020ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca 1080ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa 1140ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa 1200tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc 1260ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga 1320atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc 1380cttctatcgc cttcttgacg agttcttcta ataaggggat cttgaagttc ctattccgaa 1440gttcctattc tctagaaagt ataggaactt cgaagcagct ccagcctaca ctggtcttat 1500gacttgggcg cgctggaaaa ctatttgaac aaaacaaatt ttaatcattc agtgtttgac 1560gtgccgcttc attatcagtt ccatgctgca tcgacacagg gaggcggcta tgatatgagg 1620aaattgctga acggtacggt cgtttccaag catccgttga aatcggttac atttgtcgat 1680aaccatgata cacagccggg gcaatcgctt gagtcgactg tccaaacatg gtttaagccg 1740cttgcttacg cttttattct cacaagggaa tctggatacc ctcaggtttt ctacggggat 1800atgtacggga cgaaaggaga ctcccagcgc gaaattcctg ccttgaaaca caaaattgaa 1860cagatctctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc 1920cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg 1980cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac ccagtcacgt agcgatagcg 2040gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag tgcaccatat 2100gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc 2160ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca 2220ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg 2280agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca 2340taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa 2400cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc 2460tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc 2520gctttctcaa tgctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct 2580gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg 2640tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag 2700gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta 2760cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg 2820aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt 2880tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt 2940ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag 3000attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat 3060ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc 3120tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat 3180aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc 3240acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag 3300aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag 3360agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt 3420ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg 3480agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt 3540tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc 3600tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc 3660attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa 3720taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg 3780aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc 3840caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag 3900gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt 3960cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt 4020tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc 4080acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac 4140gaggcccttt cgtcttcaag aattaattct catgtttgac agcttatcat cgataagctg 4200actcatgttg gtattgtgaa atagacgcag atcgggaaca ctgaaaaata acagttatta 4260ttcg 4264