[发明专利]一种建立转hCGβ基因的小鼠乳腺癌肿瘤模型的方法

摘要

本发明涉及一种建立转人绒毛膜促性腺激素β亚单位(hCGβ)基因的小鼠乳腺癌肿瘤模型的方法，其为采用带有绿色荧光基因与hCGβ基因的共同表达真核表达载体pEGFP，结合流式细胞仪经过三次富集筛选技术，解决了现有技术提取单克隆很难获得转hCGβ基因细胞的难题，填补了没有建立分泌hCGβ肿瘤动物模型的空白，可以用于研究hCGβ与乳腺癌肿瘤发生，增殖，迁移和分化的机理，为在体评价CGβ抗肿瘤的效果提供小型动物模型。这对CGβ在防治hCGβ分泌型肿瘤的基础理论研究和临床前的应用研究具有重要意义。另外，其使用绿色荧光基因与hCGβ的共同表达，使在体直接观察肿瘤的生长，转移成为可能。

主权项

1.一种建立转hCGβ基因的小鼠乳腺癌肿瘤模型的方法，包括下述步骤：1)制得全长基因hCGβ，该基因在基因文库编号为：hCGβ：NM000737；2)回收纯化上述hCGβcDNA片段；3)将步骤2)得到的hCGβcDNA片段重组到带有pEGFP标记的真核表达载体中，构建成pEGFP-hCGβ真核表达质粒；4)将pEGFP-hCGβ真核表达质粒经脂质体转染小鼠乳腺癌细胞；5)用流式细胞仪筛选荧光阳性pEGFP-hCGβ转基因小鼠乳腺癌细胞；6)使用Western-Blotting验证步骤5)中荧光阳性pEGFP-hCGβ转基因小鼠乳腺癌细胞中hCGβ蛋白表达；7)流式细胞仪三次富集筛选技术获得转hCGβ基因的小鼠乳腺癌细胞；8)将步骤7)中测得的pEGFP-hCGβ转基因小鼠乳腺癌细胞注射到小鼠的乳腺位置，得到了转hCGβ基因的小鼠乳腺癌肿瘤模型。