[发明专利]一种用于制备HIV－1病毒载量测定外参照的质粒及其应用

摘要

本发明涉及一种用于制备HIV－1病毒量测定用外参照的质粒，建立HIV－1感染者和艾滋病人血浆中HIV病毒量定量测定用外参照的方法以及该外参照在HIV病毒量测定中的应用。其制备方法为：利用HIV外围引物HF/HR从HIV－1_IIIB病毒的RNA经反转录—聚合酶链式反应(RT－PCR)得到的HIV－1cDNA片断，克隆到载体以构建含有HIV－1cDNA片断的pZhcT－550重组质粒，转化至大肠杆菌感受态细胞，经PCR鉴定，筛选出阳性克隆子，获得大量重组质粒pZhcT－550。体外转录重组质粒pZhcT－550，获得供HIV病毒载量定量测定使用的RNA外参照，然后在荧光定量PCR仪上通过HIV LUX^引物的配合使用，建立了HIV感染者和艾滋病患者血浆中HIV病毒载量的定量测定方法。本发明操作简单，价格便宜，特异性好，灵敏度高，并有较好的可重复性，将为艾滋病的科学研究与防治提供有力工具。

主权项

1.一种用于制备HIV-1病毒测定的RNA外参照的重组质粒载体，其包含用引物F/R以HIV-1基因组RNA为模板反转录扩增而获得的核酸片段，其中所述引物F/R序列如下：F：5’-CGACT CATGG AGCAT CCTGC CTAAG-3’，R：5’-ACAGC GGTCA CTTGA CGAGT AATCA CTAGC-3’。