[发明专利]抗小鹅瘟病和病毒性肝炎的异源蛋黄抗体的制备方法

摘要

本发明为一种用于雏鹅小鹅瘟和病毒性肝炎疾病的预防和治疗的蛋黄抗体的制备方法。包括小鹅瘟种毒的制取，鹅病毒性肝炎种毒的制取，高免抗原的制取，蛋黄抗体的制取。经临床试验和使用结果表明：用本方法制备的异源小鹅瘟和病毒性肝炎蛋黄抗体用于预防和治疗雏鹅小鹅瘟和病毒性肝炎疾病，预防率和治愈率高、药效期长，药物效果显著，其预防率为98％以上，早期治愈率88％。用该方法制成的高免抗体，成本明显低于同源的鹅蛋黄抗体和其它血清，且可预防由同源蛋黄抗体所致的垂直传播疾病的影响。

主权项

1、一种异源抗小鹅瘟和病毒性肝炎蛋黄抗体的制备方法，包括下列步骤：(a)将冷冻保存的患小鹅瘟疾病死亡的小鹅肠道病料或患病毒性肝炎疾病死亡的小鹅肝脏病料按照1∶5加灭菌生理盐水捣碎，冻融2次后，形成混合组织悬液；将混合组织悬液进行4000rpm离心，收集上清液并于56℃处理30分钟，每毫升加入青霉素和链霉素1000单位，4℃处理2小时；将青、链霉素处理后的种毒液用灭菌生理盐水稀释100倍，经0.22um微孔滤膜过滤除菌，以0.1ml/只的剂量接种13-15日龄非免疫鹅胚尿囊腔，37℃孵育，弃去48小时内的死亡鹅胚，收集48-120小时内死亡的胚；无菌采集尿囊液及羊水；(b)将收获的尿囊毒液中加入0.1％甲醛溶液，37℃密闭灭活48小时；灭活完成后，两种毒液按照1∶1的比例混合均匀；按混合毒液96份，灭菌吐温-804份配制，即为制苗用抗原；按油相3份、水相1份的比例取油相、水相搅拌均匀，加入高压均质机中，调节压力为35mpa，乳化制备成小鹅瘟灭活油乳剂疫苗，并加入1％硫柳汞溶液使之终浓度为万分之一；(c)以制备的小鹅瘟灭活油乳剂抗原颈部皮下注射0.5ml/只；2周后，以制备的小鹅瘟灭活油乳剂抗原颈部皮下注射1.0ml/只，进行强化免疫；间隔2周后用灭活油乳剂抗原再次强化免疫一次，颈部皮下注射2.0ml/只；以后间隔8周进行一次强化免疫，每次颈部皮下注射2.0ml/只；(d)从第二次强化免疫后第7天开始，每隔三天抽样测定高免蛋黄中抗小鹅瘟和病毒性肝炎特异抗体效价；蛋黄与生理盐水按1∶3(V/V)稀释后，加与蛋黄等体积三氯甲烷进行萃提，检测萃提上清液中抗小鹅瘟和病毒性肝炎特异抗体效价，若上清液小鹅瘟琼扩抗体效价达到1∶16以上、病毒性肝炎特异抗体效价达到1∶32以上即可集蛋，用于制备小鹅瘟、病毒性肝炎蛋黄抗体；(e)将蛋壳消毒，打蛋并充分除去蛋清、胚盘和系带，收集蛋黄；于蛋黄中加入3倍体积的生理盐水，充分搅拌均匀，然后在蛋黄液中加入与蛋黄等体积的三氯甲烷，充分振荡混合均匀，室温作用60分钟，以3500-4000rpm离心30分钟，收集上层清液；(f)在分离的上清液中加入终浓度为0.05％的甲醛溶液，充分搅拌混匀，37℃保温密封8-12小时；用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即得抗体效价达到1∶16及以上异源小鹅瘟、病毒性肝炎蛋黄抗体注射液。