[发明专利]一种分离双向启动子的方法及其应用

摘要

本发明提供了一种分离双向启动子的方法。该方法首先分离组织、器官或诱导性cDNA，然后通过生物信息学手段寻找在基因组中由同一DNA连接的但转录方向相反的2个基因，并克隆该连接DNA片段作为候选双向启动子加以验证。利用此方法，本发明从水稻中分离了一个具有很强活性的双向启动子，它在稻瘟菌侵染稻叶中能诱导性地、在根中能特异组成性地驱动两个基因的强烈表达。本发明分别还在该启动子中及其下游发现了2个增强子和2个内含子，它们对该启动子有明显的增强作用。本发明还提供了该双向启动子的系列变体，它们均有不同程度的单向或双向驱动基因表达活性。本发明所提供的双向启动子及其系列变体、增强子和内含子可用于植物基因工程中。

主权项

1.一种分离植物双向启动子的方法，其特征是首先分离某一发育阶段、器官或生理状况下表达的多个基因的cDNA，并通过生物信息学手段分析它们在染色体上的具体位置；然后，从中寻找鉴定出2个位于某一段DNA的相连两侧、且转录方向相反的cDNA；进一步，以该某一段DNA序列作为后选双向驱动子通过转基因加以分析和确认其表达的器官和组织特异性以及对干旱、寒冷、盐碱、高温等非生物逆境与病虫害等生物逆境的响应；最后，通过渐变缺失确定其中的顺式元件，并选择其中适当的顺式元件和序列、通过DNA重组构建相应长度和表达强度的人工启动子。该策略尤其适用于从全基因组序列已测定的生物如水稻、拟南芥等中分离其它具有双向驱动基因表达功能或从其他植物中克隆具有双向驱动基因表达功能的启动子。这类启动子驱动其相连两侧基因的表达可具有不同的组织或器官特异性，可是诱导性表达的，也可组成性表达。