[发明专利]海螵蛸多糖CPS－1及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及医药技术领域，是从海螵蛸中提取的多糖CPS－1及其制备方法和用途。制法为：将海螵蛸粉末水煮得提取液；将提取液醇沉，透析，冷冻干燥，得海螵蛸多糖粗品；再依次用DEAESepharose F.F离子交换柱、Sephacryl S－300分子凝胶柱、Sepharose CL－6B凝胶柱分离纯化，得本发明海螵蛸多糖CPS－1。经动物实验，本发明多糖CPS－1具有治疗溃疡性结肠炎的作用，因此可用于制备治疗溃疡性结肠炎的药物。

主权项

1、海螵蛸多糖CPS-1的制备方法，步骤如下：(1)制备水提取物溶液：将海螵蛸固体粉碎成粉末，加水煮沸8-10小时，趁热抽滤得到滤液，将滤液浓缩，离心弃沉淀；上清液用氯仿与正丁醇的体积比为4∶1的sevage法萃取多次除蛋白，至水相不含蛋白质，得到水提取物溶液；(2)制备海螵蛸多糖粗品：将上述提取物溶液加乙醇沉淀过夜，离心弃上清，将沉淀复溶于蒸馏水，离心去不溶物，将上清再次醇沉，离心去上清；沉淀加蒸馏水溶解，流水透析至少36小时；将透析液冷冻干燥，得海螵蛸多糖粗品；(3)分离纯化，制备海螵蛸多糖CPS-1：将所得海螵蛸多糖粗品热水浴中溶于蒸馏水，离心收集上清，将不溶物再次热水浴中溶于蒸馏水，离心弃沉淀，将两次上清液合并，上样于DEAE SepharoseF.F离子交换柱，依次用蒸馏水、0.3mol/L氯化钠溶液进行洗脱，并用自动部分收集仪将洗脱液依次收集于试管中；使用体积比5∶1的硫酸-苯酚法分别对各个试管中的洗脱液取样进行显色反应，然后用分光光度计测480nm处OD值；依次以管号为横坐标，OD值为纵坐标，作洗脱曲线；根据洗脱曲线，将氯化钠溶液洗脱峰部位的洗脱液合并并且浓缩之，流水透析至少36小时，冷冻干燥，得淡黄色固体；将淡黄色固体复溶于蒸馏水，用同样方法依次上样于SephacrylS-300分子凝胶柱和Sepharose CL-6B凝胶柱进行分离纯化，合并洗脱峰部位的洗脱液，然后取样用HPLC检测纯度，观察电脑生成的洗脱曲线，若为单一对称峰，表明纯度好，如果不是单一对称峰，则将洗脱液浓缩后，再次用Sephacryl S-300分子凝胶柱和SepharoseCL-6B凝胶柱进行分离纯化，直到HPLC的洗脱曲线为单一对称峰；再将该洗脱液浓缩后冷冻干燥，即得本发明海螵蛸多糖CPS-1。