[发明专利]在叶绿体中同时表达7个外源基因的载体构建方法

摘要

本发明涉及一种基因工程技术领域的在叶绿体中同时表达7个外源基因的载体构建方法。构建了一种叶绿体表达载体含有组成K88ac鞭毛蛋白基因簇的faeC、faeD、faeE、faeF、faeG、faeH、faeI七个基因序列，提取编码K88ac野生菌C83907的质粒，用核苷酸序列与SEQ ID NO：1相同的引物1和核苷酸序列与SEQ ID NO：2相同的引物2进行PCR扩增，核苷酸序列3018bp与SEQ ID NO.5相同；用核苷酸序列与SEQ ID NO：3相同的引物3和核苷酸序列与SEQ ID NO：4相同的引物4进行PCR扩增，核苷酸序列与SEQ ID NO.6相同，将其与pMD18－T载体连接，转化大肠杆菌DH5α，获得含faeCD序列的大肠杆菌克隆pTEI。对克服传统的植物遗传改良的多基因操作技术的关键缺陷，同时为生产诱导仔猪产生更为有效的抗体的植物疫苗提出了一种方法。

主权项

1、一种在叶绿体中同时表达7个外源基因的载体构建方法，其特征在于，构建了一种叶绿体表达载体含有组成K88ac鞭毛蛋白基因簇的faeC、faeD、faeE、faeF、faeG、faeH、faeI七个基因序列，提取编码K88ac野生菌C83907的质粒，以野生菌C83907的质粒为模板，用核苷酸序列与SEQ ID NO：1相同的引物1和核苷酸序列与SEQ ID NO：2相同的引物2进行PCR扩增，获得全长基因faeCD的扩增产物，为3011bp，且核苷酸序与SEQ ID NO.5相同；将其与pMD18-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α，获得含faeCD序列的大肠杆菌克隆pTCD，用核苷酸序列与SEQ IDNO：3相同的引物3和核苷酸序列与SEQ ID NO：4相同的引物4进行PCR扩增，获得全长基因faeEI的扩增产物，为4186bp，且核苷酸序列与SEQ ID NO.6相同，将其与pMD18-T载体连接，转化大肠杆菌DH5α，获得含faeCD序列的大肠杆菌克隆pTEI。