[发明专利]基因重组融合蛋白PFK－K5的制备方法无效
| 申请号： | 200510111331.3 | 申请日： | 2005-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN1818069A | 公开（公告）日： | 2006-08-16 |
| 发明（设计）人： | 陈宇光;黄筱颖;张尚权;谈利松;张培德 | 申请（专利权）人： | 上海大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/62;C12N15/12;C12N15/58;C12N1/21;C12N1/19;C07K19/00;C07K1/14 |
| 代理公司： | 上海上大专利事务所 | 代理人： | 何文欣 |
| 地址： | 200444*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基因重组融合蛋白PFK－K5的制备方法。该方法包括以下步骤：重组质粒pPICZαA－PFK－K5的构建，其中包括重组质粒pPICZαA－PFK的构建、重组质粒pPICZαA－PFK－K5的构建、重组酵母基因工程菌pPICZαA－PFK－K5/GS115的构建、重组融合蛋白PFK－K5的表达、重组融合蛋白PFK－K5的纯化。毕赤酵母是真核表达系统，能以甲醇为唯一碳源，pPICZαA是分泌型表达质粒，含有醇氧化酶的强启动子(PAOX1)，在甲醇的诱导下能表达外源蛋白，并能分泌到胞外，方便蛋白的提取与纯化。毕赤酵母能通过发酵罐发酵生产大量的目的蛋白，不需要外加热源，成本低，规模大。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 重组 融合 蛋白 pfk k5 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基因重组融合蛋白PFK-K5的制备方法，其特征在于该方法，包括以下步骤：a.重组质粒pPICZαA-PFK-K5的构建：重组质粒pPICZαA-PFK-K5包括3个功能域片段和2段连接臂，3个功能域片段分别是：PF4 COOH端的13个氨基酸、K1基因和K5基因；2段连接臂分别是：连接PF4 COOH端13个氨基酸和K1基因的柔性连接臂(Gly)3；连接K1基因和K5基因的柔性连接臂(Ser(Gly)4)3；其构建方法包括如下步骤：(1)重组质粒pPICZαA-PFK的构建；(2)重组质粒pPICZαA-PFK-K5的构建；b.重组酵母基因工程菌pPICZαA-PFK-K5/GS115的构建；c.重组融合蛋白PFK-K5的表达；d.重组融合蛋白PFK-K5的纯化。
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