[发明专利]犬类精液超低温冷冻保存方法

摘要

本发明涉及一种犬类精液超低温冷冻保存方法，属于动物繁殖技术领域。将果糖、柠檬酸、三羟甲基胺基甲烷依次溶解于蒸馏水中，制得防冻液的缓冲液；将N－乙酰基－D－葡萄糖胺溶解于蒸馏水中，再加入氨基－钠－十二烷基硫酸酯和卵黄，混合均匀后在20～30℃下放置24～48小时，然后离心取上清液，加入到缓冲液中，并加入甘油或二甲基亚砜、杀菌剂，蒸馏水定容配制成防冻液；再利用防冻液将犬类精液稀释，降温平衡后进行包装冷冻，制成细管冻精放入液氮中保存。使用时再进行精子复苏解冻。本发明能够有效延长犬精子超低温冷冻保存的存活时间，提高犬冻融精子的活力、质膜完整性及顶体完整性，提高冻精人工输精的受孕率。

主权项

1、一种犬类精液超低温冷冻保存方法，其特征在于按如下步骤进行：1)将果糖0.45～3.10g、柠檬酸0.50～2.30g、三羟甲基胺基甲烷1.10～3.90g依次溶解于50mL蒸馏水中，制得防冻液的缓冲液；2)将0.01～0.10g N-乙酰基-D-葡萄糖胺溶解于20mL蒸馏水中，溶解温度为20～30℃，完全溶解后依次加入0.05～2.50mL氨基-钠-十二烷基硫酸酯和15.0～30.0mL卵黄，混合均匀后在20～30℃下放置24～48小时，然后以1000g～5000g的速率离心5～10分钟，取上清液；3)将上清液加入到防冻液的缓冲液中，并加入甘油或二甲基亚砜2.0～8.0mL、杀菌剂1000UI/mL，蒸馏水定容100mL配制成防冻液；4)在18～25℃条件下，将犬类精液与防冻液按体积比1∶3混合，得到稀释的精液，在4～8℃条件下降温平衡1.5～3.5小时，然后进行包装冷冻，包装的体积为0.20mL～0.75mL，冷冻速率为25.0～40.0℃/分钟，制成细管冻精放入液氮中保存；5)使用时，精子复苏的解冻速率为20.0～50.0℃/分钟。