[发明专利]用含3－氨基苯酚硼酸的纸片检测细菌AmpC酶的方法

摘要

本发明公开了属于生物细菌的检测技术范围的一种用含3－氨基苯酚硼酸的纸片检测细菌AmpC酶的方法。主要是利用硼酸能抑制AmpC酶的原理，先配制APB溶液，并在不加3－氨基苯酚硼酸(APB)的CAZ，CTX和FOX纸片上添加APB，采用APB纸片增强法进行纸片法药敏实验，检测细菌产生的AmpC酶。APB可使CAZ或/和CTX或/和FOX纸片对产生AmpC酶细菌的抑菌环扩大，因此通过测定对产生AmpC酶细菌抑菌环直径改变来判断AmpC酶的存在，避免使用单一底物可能带来的漏检，提高检测的阳性率。该方法具有操作简单，成本低廉，结果判读清晰，重复性好，不需要特殊实验条件的优点，易于在临床实验室推广应用。

主权项

1.一种用含3-氨基苯酚硼酸的纸片检测细菌AmpC酶的方法，其特征在于，该方法的具体检测步骤如下：1)先配制APB溶液：用二甲基亚砜作为溶剂，配成浓度为40mg/ml的溶液；所述APB分子式为C6H8BNO2.H2O，分子量为15496；2)取10μl上述APB溶液分别加入英国OXOID公司生产的每片含30μg CAZ、30μg CTX和30μg FOX的纸片上，使每片测试纸片上含APB 400μg，以制成CAZ/APB、CTX/APB和FOX/APB纸片；待纸片干后，置于2-8℃的温度下保存备用。3)具体实验操作(1)将新鲜培养的待检菌制成0.5麦氏单位菌悬液并均匀涂抹至M-H平板；(2)将不含有APB的CAZ、CTX和FOX纸片及含有APB的CAZ/APB，CTX/APB和FOX/APB纸片分别贴于涂布有待检菌的M-H平板表面，在35℃下培养过夜，观察并分别记录含有APB的CAZ/APB，CTX/APB和FOX/APB纸片与不含APB的CAZ、CTX和FOX纸片抑菌环直径；(3)结果判读：含有APB比不含APB的CAZ或/和CTX或/和FOX纸片抑菌环直径增加5mm或以上者判为AmpC酶阳性。