[发明专利]一种大白菜初级三体系的培养方法

摘要

本发明公开了一种大白菜初级三体系的培养方法，属于利用细胞遗传学理论与育种技术领域。该方法包括(1)游离小孢子培养；(2)小孢子单株系的建立；(3)2n+1(三体)植株的筛选；(4)三体类别的鉴定；(5)三体植株标记性特征的确定。本发明的特点是：采用植物组织和细胞培养技术，对四倍体大白菜的游离小孢子进行离体培养，然后从培养获得的小孢子植株中直接进行初级三体的筛选和鉴定。利用本发明的方法创建初级三体，效率高，时间短，较常规的创建方法相比，创建一套初级三体，一般可缩短2－3年。利用本发明创建的一套大白菜初级三体可广泛用以大白菜的基因定位、遗传效应研究、染色体工程育种和分子工程育种等。

主权项

1、一种大白菜初级三体系的培养方法，其特征在于对四倍体大白菜的游离小孢子进行离体培养，然后从培养获得的小孢子植株中直接进行初级三体的筛选和鉴定，包括以下步骤：(1)游离小孢子培养初花期—盛花期摘取花蕾，花蕾大小以小孢子单核靠边期为准；浅层培养法培养，小孢子密度3-5万/ml；基本培养基NLN(小孢子胚胎发生培养基)，附加：蔗糖13％-17％，6-BA(6-苄氨基嘌呤)0.2ug/L，活性炭0.01g/L；首先于33℃预培养24小时(热激处理)后，继续在25℃下培养直至形成子叶形成熟胚；(2)小孢子单株系的建立培养基MS(幼苗生长培养基)，附加：蔗糖30g/L，琼脂12g/L；子叶形胚接种到培养基上，通过腋芽增值和继代培养，使每个小孢子植株成为一个小孢子株系；(3)2n+1(三体)植株的筛选常规压片法，分别对各个小孢子株系进行染色体数目鉴定，选出2n+1＝21的(三体)株系；(4)三体类别的鉴定分别对选出的各个2n+1(三体)株系进行根尖染色体核型分析，依据染色体的大小、形态等表性特征，确定各2n+1(三体)株系的三体类别，并按染色体由长到短次序进行编号；(5)三体植株标记性特征的确定以正常的二倍体为对照，在相同的栽培管理条件下，对生殖生长阶段的植株进行详细的观察、测定、比较，分别找出各个不同三体的性状特征。