[发明专利]在非灭菌环境抑制杂菌生长的白腐真菌固定化方法

摘要

本发明公开了属于微生物应用领域的一种在非灭菌环境抑制杂菌生长的白腐真菌固定化方法。该方法是在抑制细菌生长液体培养基的基础上，采用黄孢原毛平革菌作为白腐真菌，通过正交试验筛选出具有最佳抑杂菌效果的惰性载体－聚氨酯泡沫载体，将聚氨酯泡沫作成两个三棱柱体，通过向液体培养基投加聚氨酯泡沫载体对白腐真菌进行固定化，利用聚氨酯泡沫本身的结构特点，并结合抑制细菌生长培养基，经过对比试验，不仅在培养期间内没有感染其它杂菌，而且在活性染料降解阶段获得了稳定脱色率，脱色率达到95％以上，与灭菌环境得到的结果基本一致。本发明使用方便，抑菌材料价格低廉、易得，抑杂菌效果好，并在实际中降低了因灭菌条件带来的运行成本。

主权项

1.一种在非灭菌环境抑制杂菌生长的白腐真菌固定化方法，其特征在于，该方法包括：1)菌种选择：白腐真菌采用黄孢原毛平革菌(Phanerochaetechrysosporium)，2)液体培养基选用现有的非灭菌环境白腐真菌降解活性染料的抑制细菌生长培养基，该抑菌培养基能在经灭菌培养白腐真菌5天后在非灭菌环境脱色活性染料阶段很好的抑制细菌；3)载体：白腐真菌固定化载体以采用250mL锥形瓶，100mL液体培养基进行正交试验选择，从不锈钢网、尼龙网、玻璃纤维网和聚氨酯泡沫中筛选出具有最佳抑杂菌效果的惰性载体一聚氨酯泡沫载体，载体大小为1.0×1.0×1.0cm3，载体的质量为1.2g，载体的形状为三棱柱结构；4)培养过程：将聚氨酯泡沫载体放入锅中煮沸30min，烘干后用百分之一天平称取1.2g三棱柱体聚氨酯泡沫载体，将其投放到含有100mL液体培养基(清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室研制)的250mL锥形瓶中，此时载体堆积高度高出液面，处于非浸没状态，将载体和液体培养基一起放入灭菌锅中在110～120℃下灭菌20～40min，灭菌结束后，用注射器和针头式带膜灭菌过滤器向100ml液体培养基过滤加入100mg/L维生素B1溶液1ml，并保持液体培养基中维生素B1的终浓度为1mg/L；然后，将生长在35～38℃PDA平板上的黄孢原毛平革菌BKM-F-1767孢子等量无菌接入液体培养基中，接种量为1×105个孢子/ml，再将锥形瓶放入温度为35～38℃的恒温摇床中，转速设为160rpm，在自然空气条件下培养在非灭菌环境进行白腐真菌的培养，培养期间5天；5)对活性染料的降解，非灭菌培养5天后，在非灭菌环境下向含有白腐真菌和液体培养基的锥形瓶中加入浓度为1000mg/L的未经灭菌处理的活性艳红K-2BP溶液3ml，保持锥形瓶内溶液中活性艳红K-2BP的浓度为30mg/L，时间为24小时。