[发明专利]鹅重组Ⅰ、Ⅱ干扰素的制备方法无效
| 申请号： | 200510127371.7 | 申请日： | 2005-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN1821397A | 公开（公告）日： | 2006-08-23 |
| 发明（设计）人： | 王君伟;李洪涛;马波;秘晶纬 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N15/21;C12N15/23;C12N1/21;C12N15/866;C07K14/56;C07K14/57;A61K38/21 |
| 代理公司： | 哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司 | 代理人： | 祖玉清 |
| 地址： | 150030黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明提供的是鹅重组I、II型干扰素的制备方法。通过RT－PCR扩增编码鹅IFN－α成熟蛋白及编码IFN－γ成熟蛋白基因，对基因序列分别测序鉴定，将目的基因分别定向亚克隆至pET30a原核表达载体，分别在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中，进行诱导表达，并对融合表达的目的蛋白分别进行亲合层析纯化、分别定向亚克隆至pBlueBacHis2A和pMel BacA杆状病毒转移载体，转移载体与线性化的杆状病毒DNA分别共转染昆虫细胞Sf9，重组病毒感染昆虫细胞，真核表达系统表达鹅mIFN－α与mIFN－γ。本方法得到的产品可作为鹅用抗病毒性疫病的药物及免疫佐剂增强鹅用疫苗的免疫效力。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 干扰素 制备 方法 | ||
【主权项】：
1、鹅重组I、II型干扰素的制备方法，其特征是：通过RT-PCR扩增编码鹅IFN-α成熟蛋白及编码IFN-γ成熟蛋白基因，对获得基因序列分别测序鉴定，将目的基因分别定向亚克隆至pET30a原核表达载体，分别在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中，于37℃IPTG终浓度1mM进行诱导表达，并对融合表达的目的蛋白分别进行亲合层析纯化；同时将目的基因分别定向亚克隆至pBlueBacHis2A和pMelBacA杆状病毒转移载体，利用重组杆状病毒转移载体与线性化的杆状病毒DNA分别共转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒，重组病毒感染昆虫细胞，真核表达系统表达鹅mIFN-α与mIFN-γ。
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