[发明专利]重组蔗糖合酶的生产方法、及其在生产蔗糖测定试剂盒中的应用、生产腺苷二磷酸葡糖的方法和获得具有积累了高浓度的腺苷二磷酸葡萄糖和淀粉的叶片和储藏器官的转基因植物的方法

摘要

本发明涉及一种用于大量可溶性重组的SS在其活性形式的有效生产的方法，其通过在一种大肠杆菌(Escherichia coli)菌株内表达编码SS的基因。所应用的表达载体使得这样生产的重组SS具有组氨酸尾，从而有助于其快速纯化。另外，本发明描述了SS基因的突变版本的序列，其编码适于产生ADPG的SS异构体。利用“野生型”和“突变型”版本的重组体SS，本发明还描述了一种有效用于生产ADPG和UDPG的方法。本发明进一步描述了将SS用于生产测定蔗糖的测试试剂盒的应用。最后，本发明描述了一种获得转基因植物的方法，所述转基因植物组成性地过量表达或在其储藏器官或叶片中过量表达SS基因，并且由于SS的高ADPG合成活性，该转基因植物具有高浓度的(在叶片和储藏组织中)蔗糖、ADPG、G6P和淀粉。

主权项

1.-一种以其可溶、活性形式有效生产高水平的重组蔗糖合酶(SS)酶的方法，其特征在于其包括：a)从编码马铃薯SS异构体SS4的基因的核苷酸序列获得2个由SEQID NO：1和SEQ ID NO：2序列代表的引物，基于马铃薯叶片cDNA文库，使用该引物通过PCR扩增由SEQ ID NO：3序列代表的2418碱基对的cDNA片段，b)将所述cDNA片段插入到第一载体，c)将所述第一载体插入到第一宿主微生物，所述载体在其中被扩增，d)用至少2个限制性内切酶消化扩增的构建体，e)在上述消化后，获得包含编码SSX的cDNA的DNA片段，其推断的氨基酸序列由SEQ ID NO：4代表，f)在与其相同的限制酶切位点处，将所述片段克隆到包含编码富含组氨酸序列的核苷酸序列的载体中，将所述富含组氨酸的尾融合到SS，得到第二表达载体，g)将第二载体插入到第二宿主微生物中，所述载体在其中被表达，h)在适宜的培养条件下孵化所述转化的微生物，以合成可溶、活性形式的SSX，i)分离并纯化活性形式的SSX。