[发明专利]将含有重原子的非天然氨基酸位置特异性地引入蛋白质来确定晶体结构

摘要

提供了包含优先用碘化或溴化氨基酸氨酰化正交tRNA的正交氨酰基tRNA－合成酶的翻译系统和其它组合物。也提供了编码这种合成酶的核酸，产生包含重原子氨基酸例如溴化或碘化氨基酸的蛋白质的方法与试剂盒。也提供了测定蛋白质结构的方法，例如测得用正交tRNA/氨酰基tRNA－合成酶配对位点特异性地掺入了重原子的蛋白质的结构。

主权项

1.一种包含以下组分的翻译系统：a)含有SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的正交氨酰基-tRNA合成酶；b)含有选自SEQ ID NO：1-2所示多核苷酸序列或其互补序列所编码的氨基酸序列的正交氨酰基-tRNA合成酶；c)所含氨基酸序列与天然酪氨酰氨酰基-tRNA合成酶(TyrRS)至少90％相同并含有两个或两个以上选自以下氨基酸的正交氨酰基-tRNA合成酶：i)在对应于詹氏甲烷球菌TyrRS的Tyr32位置的亮氨酸；ii)在对应于詹氏甲烷球菌TyrRS的Glu107位置的丝氨酸或谷氨酸；iii)在对应于詹氏甲烷球菌TyrRS的Asp158位置的脯氨酸；iv)在对应于詹氏甲烷球菌TyrRS的Ile159位置的亮氨酸或精氨酸；和v)在对应于詹氏甲烷球菌TyrRS的Leu162位置的谷氨酸或精氨酸；或d)优先以溴化或碘化氨基酸氨酰化正交tRNA的正交氨酰基-tRNA合成酶，其效率至少是含有氨基酸序列SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4的多肽的50％，前提是所述正交氨酰基-tRNA合成酶不含SEQ ID NO：6-9之任一。