[发明专利]生物分子中甲基化的序列特异性检测

摘要

本发明涉及检测生物分子中序列特异性甲基化的方法，所述方法包括：(a)在S－腺苷－L－甲硫氨酸－依赖性甲基转移酶的可检测辅因子存在下将生物分子与所述甲基转移酶接触；和(b)检测所述甲基转移酶的识别序列是否经辅因子或其衍生物修饰，其中所述甲基转移酶的识别序列的修饰说明所述识别序列上没有甲基化。本发明也涉及S－腺苷－L－甲硫氨酸－依赖性甲基转移酶特异性辅因子，其中所述辅因子是N－腺苷氮丙啶衍生物，它具有连接于腺嘌呤环的6或7位或连接于氮丙啶环的报道基团。而且，本发明涉及本发明辅因子和通常采用S－腺苷－L－甲硫氨酸(AdoMet)作为辅因子的甲基转移酶的复合物。此外，本发明涉及包含本发明辅因子或本发明复合物的诊断组合物。最后，本发明涉及本发明辅因子或本发明复合物在检测DNA分子中序列特异性甲基化中的应用。

主权项

1.一种检测生物分子中序列特异性甲基化的方法，所述方法包括：(a)在S-腺苷-L-甲硫氨酸-依赖性甲基转移酶的可检测辅因子的存在下将生物分子与所述甲基转移酶接触；和(b)检测所述甲基转移酶的识别位点是否经辅因子或其衍生物修饰，其中所述甲基转移酶的识别位点的修饰说明所述识别位点上没有甲基化；其中所述辅因子是式(I)代表的N-腺苷氮丙啶衍生物，式中W选自N和CH，X是N或CR¹，Y是NH₂或NHR²，Z是H、R³或CH₂CH(COOH)(NH₂)，条件是：如果X是CR¹，那么Y是NH₂且Z是H或CH₂CH(COOH)(NH₂)，如果X是N和Y是NHR²，那么Z是H或CH₂CH(COOH)(NH₂)，如果X是N和Y是NH₂，那么Z是R³，R¹选自-(CH₂)_nR⁴、-(CH＝CH)_m(CH₂)_nR⁴、-(CH₂)_o(CH＝CH)_m(CH₂)_nR⁴、-(C≡C)_m(CH₂)_nR⁴、-(C≡C)_m(C₆H₄)_o(CH₂)_nR⁴、-(C₆H₄)_m(CH₂)_nR⁴、-CO(CH₂)_nR⁴或-S(CH₂)_nR⁴；R²选自-(CH₂)_nR⁴、-(C₆H₄)_m(CH²)_nR⁴或-CO(CH₂)_nR⁴；R³选自-(CH₂)_nR⁴、-(CH＝CH)_m(CH₂)_nR⁴、-(C≡C)_m(CH₂)_nR⁴、-(C₆H₄)_m(CH₂)_nR⁴或-CONH(CH₂)_nR⁴；R⁴选自-NHR⁵、-NHCO(CH₂)_pSR⁵、-SR⁵、-OR⁵、-O(C₂H₅O)_n(C₂H₅)NHR⁵、-CH₂NHNHR⁵、-NHCOCH(CH₂SH)NHR⁵或-CONHR⁵；R⁵选自荧光团、亲和标记物、交联剂、生色团、蛋白质、肽、可任选修饰的氨基酸、核苷酸、核苷、核酸、糖、脂质、PEG、转染试剂、珠、嵌入剂、核酸切割试剂或纳米颗粒；n、m、o和p独立地选自0或1-5000的整数。