[发明专利]北美红杉叶片不定芽和体细胞胚胎的诱导与植株再生方法

摘要

本发明涉及一种北美红杉叶片不定芽和体细胞胚胎的诱导与植株再生方法，属于林业细胞工程育种领域。本发明的技术方案是取1～2cm北美红杉茎尖接种在MS培养基上继代培养；取培养28～32d和30～40d的试管苗，以远轴面接触培养基，先暗培养30d；转入新鲜培养基，再暗培养20d，然后转至光下培养。在含BA 0.5mg/L+KT 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L和BA0.5mg/L+IBA 0.5mg/L的SH培养基上，成功诱导出了不定芽和体细胞胚胎。利用此方法，可实现北美红杉苗木的大规模、短周期、高繁殖率、低成本的工厂化生产，并对于揭示细胞分化、发育、形态发生及合子胚产生的机制具有重要意义。

主权项

1.一种北美红杉叶片不定芽和体细胞胚胎的诱导与植株再生技术，其步骤为：(1)取1～2cm北美红杉茎尖接种在不加植物激素的MS(Murashing and Skoog，简称MS)培养基上，在光照强度为1500～2000lx、光周期为18h/d、温度为25±2℃的培养室内继代增殖培养；(2)取继代培养28～32d的试管苗，将其顶端针叶切成小块，以远轴面接触培养基，进行不定芽诱导；基本培养基为SH培养基(Schenk and Hildebrandt，以下简称SH)，附加的植物激素为：0.4～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(benzylaminopurine，以下简称BA)、0.1～0.2mg/L的激动素(kinetin，KT)和0.1～0.2mg/L的吲哚丁酸(indolebutyricacid，以下简称IBA)；(3)取继代培养30～40d的试管苗，将其顶端针叶切成小块，以远轴面接触培养基，进行体细胞胚胎诱导；基本培养基为SH，附加的植物激素为：0.4～0.5mg/L的BA和0.4～0.5mg/L的IBA；(4)接种后，先暗培养30d，随后转入新鲜的培养基上，再暗培养20d后，然后转至光下培养；(5)培养8周和12周时分别调查产生的不定芽数和体细胞胚胎数。