[发明专利]制作硫酸庆大霉素检测标准曲线的方法及硫酸庆大霉素酶联免疫快速检测方法

摘要

制作硫酸庆大霉素检测标准曲线的方法及硫酸庆大霉素酶联免疫快速检测方法，它涉及一种制作硫酸庆大霉素检测标准曲线的方法及硫酸庆大霉素检测方法。它解决了目前硫酸庆大霉素检测法检测时间长的问题。绘标准曲线：蛋白与硫酸庆大霉素偶联后注射入小鼠体内制备抗体，再用免疫反应棋盘法选择抗原抗体反应的工作浓度，然后挑选OD₄₅₀值为1～1.5的孔计算、绘制标准曲线。检测步骤：(一)抗体按工作浓度稀释后封闭，再按绘制标准曲线过程中抗原稀释液与抗体稀释液的体积比加入经梯度稀释的样品，再在41℃条件下酶联反应1～1.5h并用TMB显色；(二)测量OD₄₅₀值，选OD值为0.4～1.5的样品稀释液；(三)查曲线中对应数值再乘以样品稀释倍数，即得出样品硫酸庆大霉素残留量。本发明检测时间短为1～1.5h，比传统酶联免疫法快2～3h。

主权项

1、制作硫酸庆大霉素检测标准曲线的方法，其特征在于制作硫酸庆大霉素检测标准曲线的方法如下：(1)取0.17g硫酸庆大霉素分别与0.12g牛血清白蛋白和0.12g卵清白蛋白溶解于20mL、pH值为6.8的磷酸盐缓冲液，再分别加入浓度为2.5％的戊二醛10mL，搅拌28～32h；(2)在pH值为7.0的磷酸盐缓冲液中透析6～8h，微孔膜收集抗原硫酸庆大霉素蛋白偶联物；(3)取2mL硫酸庆大霉素牛血清白蛋白偶联物与8mL完全福氏佐剂或8mL不完全福氏佐剂乳化，每只鼠腹腔内注射乳化抗原0.2mL，加强免疫注射硫酸庆大霉素，直到抗体效价为1∶16以上；(4)分离血清；(5)采用硫酸铵盐析法分离血清中的抗体，再以DEAE-离子交换剂法纯化抗体；(6)梯度稀释抗体，并用浓度为1％的酪蛋白-PBS溶液封闭；(7)梯度稀释抗原硫酸庆大霉素卵清白蛋白偶联物；(8)采用免疫反应棋盘法选择抗原抗体反应的工作浓度：按棋盘法将梯度稀释的抗原硫酸庆大霉素卵清白蛋白偶联物加入梯度稀释的抗体中酶联，反应完全后用TMB显色；(9)用酶标仪在紫外光λ＝450nm下测量OD值，挑选OD450值为1～1.5的孔，以所选孔中抗体的稀释倍数作为工作浓度，并通过抗原稀释的倍数计算、绘制出标准曲线。