[发明专利]圆叶无心菜的组织培养方法

摘要

本发明是重金属超累积植物圆叶无心菜的组织培养方法。该方法以圆叶无心菜的顶芽、嫩茎或叶片为外植体，通过不同组合的试验设计，筛选出了培养条件、愈伤组织诱导、分化芽诱导、分化芽生根、炼苗和移栽的最佳方法。通过反复实验得出：诱导愈伤组织的最佳培养基是Ms+6－BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L；诱导分化芽的最佳培养基是Ms+6－BA1mg/L+NAA 0.1mg/L；诱导分化芽生根的最佳培养基是Ms+6－BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L。培养温度(25±2)℃，光照强度1600－2400lux，光照时间12/d，培养时间30天。在分化苗出瓶前打开瓶盖，2天后用清水洗掉根上的培养基，再用1‰KMnO4溶液浸泡30s，栽到高温灭菌的珍珠岩和沙土混合的基质中，置于温室中15天后，再移栽到土壤中。该方法可以通过组织培养方式快速繁殖圆叶无心菜的幼苗。

主权项

1、一种圆叶无心菜的组织培养方法，其步骤是：(1)圆叶无心菜外植体的选择以圆叶无心菜的顶芽、嫩茎和叶片为外植体；(2)圆叶无心菜愈伤组织的诱导将圆叶无心菜的顶芽、嫩茎和叶片在自来水下冲洗10-20min后，在无菌条件下用70％的酒精浸泡消毒30s，用10％NaOCl消毒8-10min，再用无菌水反复冲洗，切取0.4-0.6cm的小段，接种到经高压灭菌培养基中进行愈伤组织的诱导；基本培养基选用MS培养基，附加细胞分裂素6-BA0.1~0.8mg/L，生长NAA0.01~0.1mg/L；培养基pH值为5.8，蔗糖3％，琼脂为7g/L；培养温度(25±2)℃，光照强度1600-2400lux，光照时间12/d，培养30天；(3)圆叶无心菜愈伤组织分化芽的诱导将培养出的圆叶无心菜的愈伤组织在无菌条件下接种到经高压灭菌的培养基中进行愈伤组织分化芽的诱导；基本培养基选用MS培养基，附加细胞分裂素6-BA0.5~2.0mg/L，生长素NAA0.05~0.5mg/L；培养基pH值为5.8，蔗糖3％，琼脂为7g/L；培养温度(25±2)℃，光照强度1600-2400lux，光照时间12/d，培养30天；(4)圆叶无心菜愈伤组织分化芽生根的诱导将培养出的圆叶无心菜的愈伤组织分化芽在无菌条件下接种到经高压灭菌的培养基中进行愈伤组织分化芽生根的诱导；基本培养基选用MS培养基，附加细胞分裂素6-BA0.05~0.5mg/L，生长素NAA0.2~2.0mg/L；培养基pH值为5.8，蔗糖3％，琼脂为7g/L；培养温度(25±2)℃，光照强度1600-2400lux，光照时间12/d，培养30天；(5)炼苗及移栽在分化苗出瓶前2天保持瓶盖半遮瓶口，2天后将小苗从瓶口取出，用清水洗净根部的培养基，再用1‰KMnO4溶液浸泡30s，滤干后栽到高温灭菌的珍珠岩和沙土混合的基质中，置于温室中15天后，再移栽到土壤中。