[发明专利]一种胚胎体外着床模型的建立方法及其用途

摘要

本发明公开了一种胚胎体外着床模型的建立方法及用途，它包括选取子宫内膜、人子宫内膜基质细胞的分离培养及蜕膜化的诱导、胚胎培养、人胚胎与蜕膜化的子宫内膜基质细胞共培养等过程，由于本发明建立了使用蜕膜化的人子宫内膜基质细胞和人胚泡在体外进行共培养模型，并且观察到了人胚胎黏附、外延生长及侵入整个着床过程。该模型更接近于人类在体胚胎着床环境，利用该模型可进行一系列与胚胎着床有关影响因素的研究，使在体外观察人胚胎着床成为现实并为深入研究人胚胎着床机理提供了条件。能提高不育症治疗技术水平及辅助生殖技术水平，改善育龄人群的生育质量、生活质量和生命质量，具有重大的社会效益和经济效益。

主权项

1.一种胚胎体外着床模型的建立方法，其特征在于它包括下列步骤：a.无菌收集因妇科良性疾病行子宫切除术或清宫术的育龄妇女子宫内膜组织；b.将无菌收集的子宫内膜组织用培养液充分洗涤后制成颗粒，加入10～20ml的消化酶恒温震荡消化50～120分钟，然后用250μm的细胞筛过滤细胞悬液除去未消化的组织碎片，再用35～42μm细胞筛过滤除去上皮细胞和腺体成分；c.将上述过滤后的细胞悬液梯度离心25～35分钟，静置后取梯度离心液交界面中的细胞，将其悬浮在缓冲液中，然后进行活细胞染色并计数；d.将上述细胞种植在组织培养瓶中，使细胞密度为1×106～1×105/ml，加入含10％～15％胎牛血清、100IU/ml的青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养液后，于培养箱中培养并传代；e.传代后2～8代基质细胞被种植在培养板上，待细胞贴壁汇合成层后，加入含0.5mM 8-溴-环磷酸腺苷的F12培养液继续培养，培养3天后部分细胞蜕膜化；f.胚胎培养：受精后2天的胚胎在BlastAsist System培养液中培养5～6天，直至进入孵化阶段；g.将孵化的胚胎种植在预先准备好的蜕膜化的子宫内膜基质细胞上，在培养箱中培养48小时以上。