[发明专利]分离与富集蛋白质的分子印迹树脂和制备方法

摘要

本发明涉及分离与富集蛋白质的分子印迹树脂和制备方法，以克隆蛋白质为模板用辅助识别的限长聚合物链(识别分子)合成蛋白质印迹聚合物，具体地用于天然微量蛋白质的分离、富集。该分子印迹树脂可用于天然细胞提取物中目标蛋白质的分离、富集。本发明成球在有机相中进行，印迹在水相中进行，避免了对模板蛋白质的破坏，实用性强。以克隆蛋白质为模板的方法克服了天然微量蛋白质的印迹模板难以得到的瓶颈。使用十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳并以硝酸银染色检测吸附蛋白及其洗涤过程，这种检测方法灵敏度高，定量容易，直观准确。

主权项

1、一种分子印迹树脂，其特征在于，它的孔径为20nm，小球直径为0.2mm，按以下步骤制备：1)以丙烯酸丁酯为单体，在引发剂、催化剂和配位剂存在下，通过原子转移自由基聚合反应合成聚合度为30的链聚合物，水解后与烯丙基氯进行部分取代反应，取代后的侧基作为锚定基团，未取代的羧基作为识别基团从而得到识别分子；2)以克隆蛋白质为模板与识别分子在水溶液中进行组装，用丙烯酸甲酯聚合而成的大孔微球对识别分子/模板蛋白质组装体进行吸附，接着在体系中加入丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺，在引发剂过二硫酸胺作用下，组装体中识别分子锚定基团侧链的双键和微球表面的双键进行交联共聚，把辅助识别聚合物链固定到载体小球上；3)用高离子强度的缓冲溶液洗脱蛋白质和未聚合的识别分子，彻底去除残留蛋白质，用聚丙烯酰胺凝胶电泳/硝酸银染色的方法检测是否有残留的蛋白质，得到分子印迹树脂。