[发明专利]温敏聚异丙基丙烯酰胺－聚精氨酸缀合物转基因载体的制备

摘要

本发明公开了一种温度敏感性聚异丙基丙烯酰胺－聚精氨酸缀合物的制备方法，属于温度敏感性转基因载体的制备技术。该方法过程包括将异丙基丙烯酰胺溶解于四氢呋喃中，加入引发剂4，4－偶氮双(4－氰基戊酸)，水浴加热，在氮气保护下反应，洗涤产物，去离子水溶解产物，透析冻干得到羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺；羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺溶解于盐酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺缓冲溶液中，加入聚精氨酸，再加入碳二亚胺，搅拌反应，不同温度离心分离，冷冻干燥得到聚异丙基丙烯酰胺－聚精氨酸缀合物产物。本发明的优点在于制备方法简单，合成条件温和，所制得的产物用于转基因载体，可实现对于DNA运输和表达的调控。

主权项

1.一种温度敏感性聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物的制备方法，所述的温敏性聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物的结构式，如下式所示：其制备方法，特征包括以下步骤：1)将异丙基丙烯酰胺溶解于四氢呋喃中，磁力搅拌20分钟使之完全溶解，将溶液加入到100ml的三口烧瓶中，按照与异丙基丙烯酰胺质量比为1-5％，加入引发剂4，4′-偶氮双(4-氰基戊酸)，通氮气30分钟排除反应体系的空气，水浴加热到45-60℃，在氮气保护下反应6-8小时，以乙醚沉淀洗涤产物三次，去离子水溶解产物，透析5天，冻干得到羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺；2)将步骤1)反应所得的羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺溶解于pH为4.5-5.5的盐酸/N，N，N′，N′四甲基乙二胺缓冲溶液中，按照与聚异丙基丙烯酰胺质量比为10-20％称取聚精氨酸加入到含有羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺的缓冲溶液中，并按碳二亚胺与聚异丙基丙烯酰胺的质量比为5∶1-10∶1加入碳二亚胺，在5-20℃下磁力搅拌反应48-72小时，将产物在32℃离心除去羧基封端的聚异丙基丙烯酰胺，收集上清，再于37℃离心，收集沉淀，冷冻干燥得到聚异丙基丙烯酰胺-聚精氨酸缀合物产物。