[发明专利]一种端粒酶活性定量检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种端粒酶活性定量检测方法，通过将端粒酶反应产物特异性的分子信标探针引入到端粒酶活性的PCR检测当中，极大地提高了端粒酶活性检测的特异性，为其在临床上的应用推广提供了条件。为了保证分子信标探针的顺利引入，本发明采取了一种特殊的PCR扩增策略，即在对得到的端粒酶反应产物进行PCR扩增时，使用了一个PCR正向引物和的逆向引物1和2。本发明还提供了包含所述分子信标探针和逆向引物1和2的试剂盒。

主权项

1、一种端粒酶活性定量检测方法，包括：(1)从待测样品中提取活性端粒酶；(2)在PCR体系中，将提取的端粒酶作用于特定的底物，得到携带有端粒重复序列的端粒酶反应产物；(3)对得到的端粒酶反应产物进行PCR扩增；(4)在PCR扩增的同时对扩增产物进行检测；其特征在于：(1)在端粒酶的PCR检测体系中引入了端粒酶反应产物特异性的分子信标探针，通过监测分子信标探针所产生的荧光信号用以对扩增产物进行检测。所述分子信标探针是以端粒重复序列或其互补序列为作用靶点；(2)对得到的端粒酶反应产物进行PCR扩增时，使用一个PCR正向引物和逆向引物1和2；所述逆向引物1的3′-端或靠近3′-端的位置包含有与端粒重复序列互补的核苷酸序列；5′-端或靠近5′端的位置包含有与逆向引物2或逆向引物2的3′-端相同或相似的核苷酸序列；且逆向引物1的3′-端经过修饰，丧失了在PCR扩增反应中的延伸能力；所述逆向引物2的全部核苷酸序列或3′-端的一段核苷酸序列与逆向引物1上的某段序列相同或相近。