[发明专利]多杀巴斯德氏菌聚合酶链式反应检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明涉及一种多杀巴斯德氏菌PCR快速检测试剂盒和检测方法。属于兽医学和水产学诊断技术领域，主要技术方案是利用PCR技术特异性扩增16S－23S核糖体RNA转录间区，达到区分多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)和相近致病菌的目的，并且能够排除一些用传统的生化鉴定难以排除的与多杀巴斯德氏菌相近的几个致病菌。该方法与传统方法相比能够大大提高兽医临床诊断多杀巴斯德氏菌的效率，缩短诊断时间，准确度更高，节省劳动力和成本。

主权项

1、一种多杀巴斯德氏菌PCR快速检测试剂盒，其特征在于试剂盒包括：(1)DNA提取试剂：TE缓冲液，5-15mmol/L Tris，0.5-1.5mmol/L EDTA，pH 8.0；溶菌酶，浓度10-20mg/mL，pH8.0；蛋白酶K溶液，浓度10-20mg/mL，pH8.0；Tris饱和酚，pH8.0；乙酸钠，浓度2-5mol/L；乙醇，浓度95％；(2)PCR试剂盒成分为：10×buffer：含100mmol/L Tris-HCl，450-550mmol/L KCl，pH 8.3；dNTPs：dATP，dTTP，dCTP，dGTP的混合物，每种浓度5-15mmol/L；特异性寡核苷酸引物：引物1为5’-CGAAAGCAAAAGAGTGAA-3’、引物2为5’-CCGTAATCAGACCTATCC-3’，各引物浓度均为5-15μmol/L；双蒸水；Taq DNA聚合酶：5u/μL；MgCl2：10-20mmol/L。