[发明专利]应用特异性靶蛋白检测姜黄素对前列腺癌细胞抑制作用的方法无效
| 申请号： | 200610016196.9 | 申请日： | 2006-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN1936583A | 公开（公告）日： | 2007-03-28 |
| 发明（设计）人： | 杨磊;呼文亮;陈立军;王洪敏;牟心红;靳秋月;姚丽;锁江蕊;谢红;王瑞岷;王玮;程世翔;樊嵘 | 申请（专利权）人： | 中国人民武装警察部队医学院 |
| 主分类号： | G01N33/544 | 分类号： | G01N33/544;G01N33/531;G01N33/15 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 | 代理人： | 江增俊 |
| 地址： | 3001*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明是一种应用特异性靶蛋白检测姜黄素对前列腺癌细胞抑制作用的方法，属于分子生物学领域，本方法利用特异性靶蛋白AR、通过癌细胞生长情况和凋亡率检测姜黄素对前列腺癌细胞抑制作用，其检测结果证明是准确的，同时，也能证明免疫印迹技术在本方法中的具体应用也是可靠的。该方法具有简单和易于推广应用的突出优点。 | ||
| 搜索关键词： | 应用 特异性 蛋白 检测 姜黄 前列腺 癌细胞 抑制 作用 方法 | ||
【主权项】：
1.一种应用特异性靶蛋白检测姜黄素对前列腺癌细胞抑制作用的方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)由姜黄素处理LNCap细胞，显微镜下观察细胞形态变化；MTT法检测LNCap细胞生长情况；流式细胞技术FCM检测细胞凋亡率；(2)用免疫印迹Western-blotting技术检测雄激素受体蛋白AR的表达：①由姜黄素处理的前列腺癌雄激素依赖性细胞至少24h后收集，用PBS洗涤三次后加入细胞裂解液，细胞裂解后离心取上清液，沸水浴蛋白变性后Bradford蛋白定量测定蛋白浓度，其合适浓度范围为0.5-2μg/μL；②裂解后所得细胞总蛋白进行SDS-PAGE电泳，经电泳后的凝胶于60mA恒流转移，将蛋白质条带转移至硝酸纤维素膜，选用可复性丽春红染液振荡染色，并根据蛋白质Marker比较条带分子量大小去除非特异性条带，先后加入一抗和二抗后，用ECL荧光western-blotting试剂盒显色，显影、定影。
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