[发明专利]体外泌香制备的麝鼠香活性组分、制备工艺及其用途

摘要

一种体外泌香制备的麝鼠香活性组分，包含七个碳到二十一个碳的环烷酮类、脂肪酸及其酯类、三个碳到三十三个碳的环烷醇类、醛类和烯类，剥取麝鼠香香腺囊、剪下皮质部分用PBS漂洗，加原代培养液制成悬液，排种在培养瓶底壁上，加入培养液培养，选择生长到致密阶段的细胞，加入胰蛋白酶进行消化，用吸管轻轻吹打细胞单层，吸出并移入另一培养瓶中，再加入培养液，恒温培养，分离出麝鼠香油状物，加入胰蛋白酶反应后，加入1，3丙二醇或丙酮，静置，分离，加入高锰酸钾，用活性炭静置再除去高锰酸钾，离心，用1，3丙二醇萃取，再除去溶剂。制备工艺简单易行，产品质量稳定，产率高，适合规模化工业生产。易于储存，是一种新动物香料及药物药材。

主权项

1、一种体外泌香制备的麝鼠香活性组分，其特征在于：包含七个碳到二十一个碳的环烷酮类、脂肪酸及其酯类、三个碳到三十三个碳的环烷醇类、醛类和烯类成分，是通过如下工艺制备的：(1)原代培养1)取材：用消毒过的解剖剪取香腺组织，放入消毒过的培养皿中，用PBS溶液漂洗2～3次以清去血污；2)分离组织：在培养皿中用消毒过的眼科剪将组织反复剪成0.5mm2-1mm2的小块，再用PBS吹打清洗；3)接种：用吸管加2滴原代培养液，用弯头吸管前端将组织块轻轻吹打均匀，制成悬液，然后仍用吸管前端吸取组织悬液，将其均匀的排种在培养瓶底壁上；4)培养：将培养瓶慢慢翻转，使瓶底向上，加入3-4ml培养液，盖好瓶塞，置于37℃恒温培养箱中培养2h-3h，待组织块略干燥能牢固贴于瓶壁上后，再缓慢反转培养瓶使培养液覆盖组织块，继续静放培养；5)三天后开始对接种培养的细胞进行常规检查：将培养瓶轻轻置于倒置相差显微镜下，如果无污染且细胞生长良好，可见培养液颜色由原来的橘红色变成黄色，此时可补加或更换培养液，10d-15d后可长成单层细胞，这时可进行传代培养；(2)传代培养1)倒置相差显微镜下选择生长到致密阶段的细胞，弃旧培养液；2)用少量HanK`S液加入培养瓶中轻轻震荡后弃之，加入0.25％胰酶5-8滴进行消化，轻动培养瓶使消化液湿润整个细胞层，室温作用2min-5min，肉眼观察瓶底细胞单层，待其出现针孔般大小空隙时即可弃去消化液，若见消化程度不够，可再消化1min，若见细胞大片脱落，表明已消化过头，则不能弃掉消化液，应直接进行下一步骤；3)加入3ml-4ml培养液，用吸管轻轻吹打细胞单层，直到细胞脱落形成细胞悬液，吹打均匀后吸出1ml已入另一培养瓶中，再加入4ml培养液，盖好瓶盖，置37℃恒温培养箱中培养；4)每天对传代细胞进行观察，注意是否有污染及生长情况，如生长良好可每隔3d换液一次，5d-7d可再传代；(3)麝鼠香活性组分的制备工艺：1)麝鼠香腺囊分泌物加入一倍量的胰蛋白酶在-10℃-120℃温度下进行反应3-40小时，得混合液；2)加入混合液一倍量的1，3丙二醇或丙酮，充分混合，静置1-73小时；3)混合液2000转/分离下层和上层溶液，加入高锰酸钾1-50mg反应0.5-100小时；4)用0.8-10倍量活性碳静置1-36小时，除去高锰酸钾；5)离心后置于-10℃-100℃温度下，用1，3丙二醇萃取次数为1-8次，每次加入溶液量为3-10倍，再除去溶剂所得麝鼠香活性组分为50-90％。