[发明专利]应用嫁接技术提高转基因大豆的遗传转化效率的方法

摘要

本发明属于植物转基因技术领域，具体涉及提高转基因大豆遗传转化效率的方法。通过农杆菌介导大豆子叶节转化系统和胚尖转化系统获得转化不定芽，这些不定芽不经过生根、炼苗过程，直接做成接穗，采用劈接法嫁接到大豆实生苗砧木上，接穗与砧木经过接合期、愈合期、融合期和成活期四个阶段。成功的克服了大豆遗传转化效率低的限制性因素。嫁接可以提高转化植株的成活率，使成活率达到90％以上，很大程度上提高了大豆遗传转化效率，显著缩短了大豆遗传转化的周期，将改变大豆遗传转化难的现状，促进大豆遗传转化的研究和产业化发展。

主权项

1、应用嫁接技术提高转基因大豆的遗传转化效率的方法，其特征是主要步骤如下：1)农杆菌介导大豆子叶节转化系统：大豆种子进行氯气灭菌，然后接种到发芽培养基中4-6天，收集子叶节作为外植体，用含有目的基因的农杆菌侵染大豆子叶节，经过共培养阶段后，将外植体接种到分化筛选培养基中进行不定芽诱导，经过几次继代培养后，不定芽长到1.5-3.0cm时就可以作为接穗进行嫁接；2)农杆菌介导大豆胚尖转化系统：大豆种子进行氯气灭菌，浸泡18-22小时，收集胚尖，用含有目的基因的农杆菌侵染大豆胚尖，经过共培养阶段后，将外植体接种到分化筛选培养基中进行不定芽诱导，经过一次继代培养后不定芽生长到2-3cm时就可以作为接穗进行嫁接；3)劈接法嫁接：栽种大豆实生苗作为砧木来源，待实生苗的第一片真叶发生时，切除真叶，沿轴线切0.5-1.0cm左右的切口，砧木准备完毕，将获得的大豆子叶节和胚尖的转化不定芽末段造成锲型创口嫁接到砧木上，绑缚结实；4)建立嫁接材料的适宜生长条件：嫁接后的植株用黑色袋罩好，每天喷水保湿，避光培养，培养温度为20-23℃，5-7天后嫁接苗成活；5)提取嫁接大豆植株的嫩叶总DNA和种子总DNA，用PCR方法检测转基因大豆植株当代和T1代种子的转化特征；