[发明专利]食用菌和植物双链RNA病毒检测试剂盒及其应用

摘要

本发明涉及一种食用菌和植物双链RNA病毒检测试剂盒及其应用，它包含有以下药物：(1)提取缓冲液；(2)提取双链RNA的药物；(3)纯化的药物；(4)双链RNA的琼脂糖凝胶电泳检测药物。由于双链RNA对酶具有一定的抗性，因而较易操作。采用本发明的试剂盒不但能检测出病毒颗粒中的双链RNA，也可检测出裸露的双链RNA；本发明中可以利用琼脂糖凝胶电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的双链RNA做进一步的理论分析。采用本发明的试剂盒不需要特殊设备，研究周期短，简便、快速、灵敏，能在较少的样品中检测到病毒，不容易出现假阳性。本发明可以广泛的应用于食用菌和植物双链RNA病毒的检测，为脱毒菌种和脱毒苗的生产、制备，以及为防止病毒危害提供了有利手段。

主权项

1、食用菌和植物双链RNA病毒检测试剂盒，其特征在于，它包含有以下药物：(1)提取缓冲液由去垢剂、抗氧化剂及螯合剂组成的提取缓冲液，具有高盐、高pH值的物质，所述的提取缓冲液成分包括：(a)GPS 0.2M甘氨酸、0.1M磷酸氢二钠、0.6M氯化钠，pH＝9.5；(b)STE 0.1M氯化钠、0.05M三羟甲基氨基甲烷(Tris)、0.001M乙二胺四乙酸(EDTA)pH＝8；(c)10％的十二烷基硫酸钠(SDS)；(d)β-巯基乙醇；(2)提取双链RNA的药物(a)饱和酚/氯仿/异戊醇体系，其中氯仿/异戊醇的体积比为25/1(b)乙酸钠3M(3)纯化的药物(a)纤维素(b)含15％的1×STE缓冲液(c)玻璃纤维；(4)双链RNA的琼脂糖凝胶电泳检测药物(a)TAE 2M三羟甲基氨基甲烷(Tris)、1M乙酸、0.1M乙二胺四乙酸(EDTA)(b)2×SSC 0.3M氯化钠、0.03M柠檬酸钠(c)RNA酶A 100ug/ml(d)DNA酶I(RNase free)(e)分子marker(λ噬菌体DNA HindIII)(f)6×loading buffer(6×上样缓冲溶液)。