[发明专利]同步检测沙眼衣原体和细小脲原体的荧光定量PCR试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速同步检测沙眼衣原体和细小脲原体荧光定量PCR试剂盒，涉及一种性传播疾病病原体基因检测技术，适用于沙眼衣原体和细小脲原体快速同步定性定量检测。本发明由DNA裂解液、荧光定量PCR反应液、标准阳性模板pU－UP、标准阳性模板pU－CT、阴性质控标准品组成；荧光定量PCR反应液含有沙眼衣原体特异性引物对和荧光探针，以及细小脲原体特异性引物对和荧光探针。本发明特异性好，灵敏度高，定量精确，快速简便，可重复性高，可同步检测沙眼衣原体和细小脲原体，并可替代传统的培养法和ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断方法。

主权项

1、一种同步检测沙眼衣原体和细小脲原体荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：由DNA裂解液、荧光定量PCR反应液、标准阳性模板pU-UP、标准阳性模板pU-CT、阴性质控标准品组成；荧光定量PCR反应液含有沙眼衣原体特异性引物对和荧光探针，以及细小脲原体特异性引物对和荧光探针；①UP正向引物为5′-CATTGATGTTGCACAAGGAGAAA-3′，反向引物为5＇-TTAGCACCAACATAAGGAGCTAAATC-3′；荧光探针序列为5′-TTGACCACCCTTACGAG-3′；荧光探针5′端标记报告荧光基团HEX，3′端标记不发光的淬灭基团标记，并连接小型凹槽结合物-MGB基团，可以大大提高探针的退火温度，标准阳性模板pU-UP是含有细小脲原体高度保守基因-脲酶基因的111个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；②CT正向引物为5′-TTCAGTTGGGCCAGATCATG-3′，反向引物为5′-CTCTTCATCGGTGGCTAATGTATAAA-3′；荧光探针序列为5′-AGGCTCGTCCTGACTCATGCATTTCG-3′；荧光探针5′端标记FAM，3′端标记TAMRA基团，标准阳性模板pU-CT是含有沙眼衣原体高度保守基因trp基因73个碱基对的核苷酸片段构成的pUCm-T载体，该载体在大肠杆菌DH5α中增殖；所述的PCR即聚合酶链式反应，所述的UP即细小脲原体，所述的CT即沙眼衣原体。