[发明专利]快速富集痕量多肽或蛋白质并实现鉴定的方法

摘要

本发明是一种以纳米碳酸钙粒子表面原位聚合聚甲基丙烯酸甲酯材料(简称CaCO₃－PMMA)作为纳米吸附剂，进行痕量肽及蛋白样品的富集——伴随无固态颗粒化基质辅助激光解析离子源质谱直接分析的方法。此组装纳米材料可对蛋白质和多肽进行快速高效富集，与基质辅助激光解吸离子源质谱有很好的相容性，吸附了样品的CaCO₃－PMMA在进入质谱分析前被巧妙的去核——从而避免固体颗粒对信号重现性的影响及其溅射对质谱仪器的损害。本发明操作简单，快速高效，既避免了常规吹干富集方法的样品损失问题，又具有很好的耐盐性。本发明可广泛应用于蛋白质组学相关领域。

主权项

1、一种快速富集痕量多肽或蛋白质并实现无固态颗粒化质谱分析的方法，其特征是利用记号为CaCO3-PMMA的以纳米碳酸钙粒子表面原位乳液聚合接枝包覆的聚甲基丙烯酸甲酯材料作为纳米吸附剂对多肽和蛋白样品吸附，对痕量多肽或蛋白进行富集后，通过去核保证多肽或蛋白质的全提取并直接完成无固态颗粒化——基质辅助激光解析离子化质谱的分析检测，具体步骤是：(1)以CaCO3-PMMA作为纳米吸附剂，对多肽或蛋白质样品的溶液进行富集，样品溶液浓度是1×10-15mol/μL至1×10-10mol/μL，富集时间在10-12分钟之间，富集温度在25-37摄氏度之间，CaCO3-PMMA的溶液浓度在10-15mg/ml之间；(2)对富集了样品的CaCO3-PMMA溶液进行离心、去核处理，将富集的多肽或蛋白质及PMMA链混合物可直接与有机基质在靶板上均匀混合，形成均匀细致的结晶，进行基质辅助激光解析离子化质谱分析；(3)根据质谱结果，鉴定多肽或蛋白质。