[发明专利]同位素15N标记L－半胱氨酸的制备方法

摘要

本发明涉及同位素¹⁵N标记的L－半胱氨酸的制备方法。该发明利用有机合成的方法，采用含有同位素标记¹⁵N的无机原料，合成得到标记¹⁵N的D，L－半胱氨酸前体，再经拆分得到标记¹⁵N－L－半胱氨酸。本发明具有¹⁵N原料利用率高的特点，提纯得到的产品纯度在99％以上，同位素¹⁵N丰度在98％以上。该方法同样也适用于各种D－、D，L－型¹⁵N标记L－半胱氨酸和L－胱氨酸的合成。

主权项

1.同位素15N标记L-半胱氨酸的制备方法，其特征在于，该方法包括以下工艺步骤：(1)邻苯二甲酰亚胺钾盐的制备将含有15N标记无机氮源与碱性溶液作用，经邻苯二甲酸溶液充分吸收氨气后，蒸除溶剂，加热后得到邻苯二甲酰亚胺固体，将该固体与KOH的甲醇溶液作用得到邻苯二甲酰亚胺钾盐；无机氮源、邻苯二甲酸、KOH的用量比为1∶1～5∶1～3；(2)邻苯二甲酰亚胺抱丙二酸二乙酯钠盐的制备将邻苯二甲酰亚胺钾盐与新鲜制备的溴代丙二酸二乙酯作用，经加热、冷却、研磨、洗涤后得到邻苯二甲酰亚胺抱丙二酸二乙酯；再将该前体加热溶解于适量无水甲苯，加入稍过量的金属钠，搅拌反应1～7小时，冷却过滤后得到黄色产物，为15N标记的邻苯二甲酰亚胺抱丙二酸二乙酯钠盐，简称钠盐，下同；(3)缩合反应将钠盐和苄基氯甲硫醚、无水甲苯共热并回流5～25小时后，过滤沉淀，蒸除滤液中的甲苯，并经无水乙醇重结晶后得到15N标记的N-苄基氯甲硫醚基邻苯二甲酰亚胺抱丙二酸二乙酯，简称缩合产物，下同；(4)水解反应将缩合产物悬浮于乙醇与水的1∶1混合物中，于搅拌下加入5mol/L NaOH，并保持温度在55～60℃反应1～12小时，再加入足量HCl彻底水解；母液调pH值至中性后，析出的沉淀经乙醇洗涤、过滤、重结晶后，得到晶体状15N标记的D，L-苄基半胱氨酸；(5)拆分过程采用氨基酰化酶法拆分的方法，将上述D，L-苄基半胱氨酸经乙酰化、氨基酰化酶拆分，分离后得到15N标记的L-苄基半胱氨酸；未反应的D-型乙酰化苄基半胱氨酸可经消旋后继续用于拆分；(6)解保护反应L-苄基半胱氨酸于-70～-33.5℃低温下，溶解于适量液氨中，缓慢加入小块金属钠至体系维持蓝色3～5min不褪；反应完成后蒸发除去液氨，残余物缓慢加水溶解，调pH值至中性、空气流氧化，过滤、干燥后，得到15N标记的L-胱氨酸，经还原后可得到15N标记的L-半胱氨酸。