[发明专利]麝香水溶性提取物提高神经干细胞电穿孔转染效率的方法

摘要

本发明涉及一种利用麝香水溶性提取物来提高神经干细胞电转染率的方法。本发明方法包括：配制麝香水溶液性提取物、带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的质粒DNA抽提、大鼠神经干细胞的分离和培养、电转染。本发明方法采用低浓度的麝香水溶物来提高大鼠神经干细胞电转化效率，可以达到不影响培养细胞生长而提高电转染效率的目的。

主权项

1.麝香水溶性提取物提高神经干细胞电穿孔转染率的方法，其特征在于，该方法的具体步骤为：a.配制麝香提取物的水溶液；b.带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的质粒pEGFP-C1的DNA抽提；c.大鼠神经干细胞的分离和培养，采用的基础培养液的组成为：DMEM/F12的体积比为1∶1，100U/mL的青霉素和链霉素，2％的B27；原代培养液为：基础培养液分别加20ng/mL的EGF和bFGF，得到待转染的培养细胞；d.电转染方法，具体步骤如下：(a)、在步骤c中得到的待转染的培养细胞中加入步骤a中配制的麝香水溶性提取物，使待转染的培养细胞中麝香的终浓度达到0.1-0.5‰，培养2-10小时；(b)、将步骤(a)得到的培养细胞离心分离，转速为1000转/分，时间为3分钟，沉淀细胞重悬于电转化缓冲液中，制成密度为1×107个/mL的细胞悬液；所用的电转化缓冲液为：KCl 25mM，KH2PO4 0.3mM，K2HPO4 0.85mM，pH7.2；(c)、将步骤b抽提的质粒DNA加入到细胞悬液中，使细胞悬液中质粒DNA的总浓度为5-20μg/mL，混匀；(d)、将步骤(c)中的细胞悬液移入冰上预冷的100μL电转化杯中，用电转化仪在室温下电击一次，电压为200-250伏特，时间为80-120微秒，电击完毕后，将转化杯置于冰上10分钟；(e)、将电转化杯中的培养细胞转到细胞培养皿中，用基础培养液将被转染的细胞稀释10倍，置于培养箱中，在37℃，5％CO2下培养，观察细胞形态并传代培养。