[发明专利]基因重组融合蛋白K1－VEGF121的制备方法无效
| 申请号： | 200610026211.8 | 申请日： | 2006-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN1940073A | 公开（公告）日： | 2007-04-04 |
| 发明（设计）人： | 黄筱颖;陈宇光 | 申请（专利权）人： | 上海大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/63;C12N15/81;C12N1/19 |
| 代理公司： | 上海上大专利事务所 | 代理人： | 何文欣 |
| 地址： | 200444*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基因重组融合蛋白K1－VEGF121的制备方法。该方法包括以下步骤：重组质粒pPICZαA－K1－VEGF121的构建(包括重组质粒pPICZαA－K1的构建、重组质粒pPICZαA－K1－VEGF121的构建)、重组酵母基因工程菌pPICZαA－K1－VEGF121/GS115的构建、重组融合蛋白K1－VEGF121的表达、重组融合蛋白K1－VEGF121的纯化。毕赤酵母是真核表达系统，能以甲醇为唯一碳源，pPICZαA是分泌型表达质粒，含有醇氧化酶的强启动子(PAOX1)，在甲醇的诱导下能表达外源蛋白，并能分泌到胞外，方便蛋白的提取与纯化。毕赤酵母能通过发酵罐发酵生产大量的目的蛋白，不需要外加热源，成本低，规模大。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 重组 融合 蛋白 k1 vegf121 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基因重组融合蛋白K1-VEGF121的制备方法，其特征在于该方法，包括以下步骤：a.重组质粒pPICZαA-K1-VEGF121的构建：融合基因K1-VEGF121包括2个功能域片段和1段连接臂，2个功能域片段分别是：K1基因和VEGF121基因；1段连接臂是：连接K1基因和VEGF121基因的柔性连接臂(Gly)3；其构建方法包括如下步骤：(1)重组质粒pPICZαA-K1的构建；(2)重组质粒pPICZαA-K1-VEGF121的构建；b.重组酵母基因工程菌pPICZαA-K1-VEGF121/GS115的构建；c.重组融合蛋白K1-VEGF121的表达；d.重组融合蛋白K1-VEGF121的纯化。
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