[发明专利]基因重组融合蛋白PFK的制备方法无效
申请号: | 200610026217.5 | 申请日: | 2006-04-28 |
公开(公告)号: | CN1948477A | 公开(公告)日: | 2007-04-18 |
发明(设计)人: | 陈宇光;黄筱颖 | 申请(专利权)人: | 上海大学 |
主分类号: | C12N15/09 | 分类号: | C12N15/09;C12N15/62;C12N15/81;C12N1/19;C12P21/08;C07K19/00;A61K38/16;A61P35/00 |
代理公司: | 上海上大专利事务所 | 代理人: | 何文欣 |
地址: | 200444*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明涉及一种基因重组融合蛋白PFK的制备方法。该方法包括以下步骤:重组质粒pPICZαA-PFK的构建、重组酵母基因工程菌pPICZαA-PFK/GS115的构建、重组融合蛋白PFK的表达、重组融合蛋白PFK的纯化。毕赤酵母是真核表达系统,能以甲醇为唯一碳源,pPICZαA是分泌型表达质粒,含有醇氧化酶的强启动子(PAOX1),在甲醇的诱导下能表达外源蛋白,并能分泌到胞外,方便蛋白的提取与纯化。毕赤酵母能通过发酵罐发酵生产大量的目的蛋白,不需要外加热源,成本低,规模大。 | ||
搜索关键词: | 基因 重组 融合 蛋白 pfk 制备 方法 | ||
【主权项】:
1.一种基因重组融合蛋白PFK的制备方法,其特征在于该方法,包括以下步骤:a.重组质粒pPICZαA-PFK的构建:重组质粒pPICZαA-PFK包括2个功能域片段和2段连接臂,2个功能域片段分别是:PF4 COOH端的13个氨基酸、K1基因;2段连接臂分别是:连接PF4 COOH端13个氨基酸和K1基因的柔性连接臂(Gly)3;连接K1基因和K5基因的柔性连接臂(Ser(Gly)4)3;b.重组酵母基因工程菌pPICZαA-PFK/GS115的构建;c.重组融合蛋白PFK的表达;d.重组融合蛋白PFK的纯化。
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