[发明专利]MGB探针多重荧光定量PCR检测大肠杆菌O157的方法有效
| 申请号： | 200610028327.5 | 申请日： | 2006-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN1952647A | 公开（公告）日： | 2007-04-25 |
| 发明（设计）人： | 严亚贤;朱向玲;孙建和;陆承平 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N21/76;C12Q1/10 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种MGB探针多重荧光定量PCR检测大肠杆菌O157的方法，构建重组质粒，设计合成引物和Taqman－MGB探针，进行二重荧光定量PCR，将大肠杆菌O157的rfbE、vt2的一段保守序列进行PCR扩增，获得目的片断，再将目的片断与PMD 18－T Vector连接，得到重组质粒，将重组质粒转化DH5a感受态大肠杆菌细胞，扩大培养，获得高浓度的质粒，将此高浓度质粒作10倍比稀释，作为标准样品，将标准样品和待测样品共同作二重荧光定量PCR，标准样品形成标准曲线，根据标准曲线可计算出待检样品中大肠杆菌O157的含量。本发明使用MGB探针，具有更高的敏感性和特异性，能快速、准确地检测样本中的大肠杆菌O157含量，可同时检测大肠杆菌O157的两个特异性毒力基因，是一种快速、准确的大肠杆菌O157检测方法。 | ||
| 搜索关键词： | mgb 探针 多重 荧光 定量 pcr 检测 大肠杆菌 o157 方法 | ||
【主权项】：
1、一种MGB探针多重荧光定量PCR检测大肠杆菌0157的方法，其特征在于，设计合成rfbE、vt2引物和Taqman-MGB探针，分别用rfbE、vt2引物进行PCR扩增，获得两个目的片断，将目的片断分别与PMD 18-T Vector连接，得到重组质粒，将重组质粒转化DH5α感受态大肠杆菌细胞，扩大培养，提取高浓度的重组质粒，将此高浓度质粒作10倍比稀释，作为标准样品，将标准样品和待测样品共同作二重荧光定量PCR，标准样品形成标准曲线，根据标准曲线计算出待检样品中大肠杆菌0157的含量。
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