[发明专利]猪雌激素受体基因单体型的分离鉴定方法

摘要

本发明涉及一种猪雌激素受体基因单体型的分离鉴定方法，属于家畜分子生物学技术领域。方法的步骤包括，提取猪的基因组DNA，猪雌激素受体基因的PCR聚合酶链式反应扩增，扩增产物的多态性检测，单体型的构建及其与猪繁殖性状的相关性分析。本发明的特征是分离鉴定出一个新的猪雌激素受体基因的单体型H121。本发明利用猪雌激素受体基因的单体型与猪繁殖性状显著相关的特性，为猪的标记辅助选种和选配提供了新的分子标记方法。

主权项

1、一种猪雌激素受体基因单体型的分离鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：1)采集猪耳组织，利用常规的苯酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA；2)针对猪雌激素受体基因的Pvu II单核苷酸多态性位点C/T，设计雌激素受体基因特异性引物，进行PCR反应，得到扩增产物1；其中，所述的基因特异性引物具有5’-CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG-3’和5’-CACTTCGAGGGTCAGTCCAATTAG-3’的序列，所述的扩增产物1长度为100～2000bp，且含有猪雌激素受体基因的Pvu II单核苷酸多态性位点C/T；3)针对猪雌激素受体基因的Ava I单核苷酸多态性位点C/T和MspA1I单核苷酸多态性位点A/G设计猪雌激素受体基因特异性引物，进行PCR反应，得到扩增产物2；其中，所述的基因特异性引物具有5’-CCCTCTATGACCTGCTGCTG-3’和5’-GGAAGTTCTCCGCCTCCGC-3’的序列，所述的扩增产物2长度为100～2000bp，且含有猪雌激素受体基因的Ava I单核苷酸多态性位点C/T和MspA1I单核苷酸多态性位点A/G；4)检测扩增产物1的Pvu II单核苷酸多态性位点C/T和扩增产物2的Ava I单核苷酸多态性位点C/T和MspA1I单核苷酸多态性位点A/G的多态性；5)构建单体型，针对扩增产物的多态性用统计分析的方法共分离鉴定出4种单体型H121，H211，H111，H221；6)通过偏回归分析方法确定与猪繁殖性状相关的单体型，其中，单体型H121与初产总仔数显著正相关，携带有上述单体型H121的个体初产总仔数性状显著优于含有其它单体型的个体；其中所述的单体型H121在Pvu II单核苷酸多态性位点C/T、Ava I单核苷酸多态性位点C/T和MspA1I单核苷酸多态性位点A/G分别为C、T、G。