[发明专利]系统诱导黄瓜抗白粉病生物型种衣剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种统诱导黄瓜抗白粉病生物型种衣剂的制备方法，采用拮抗木霉菌突变株发酵产生的代谢物与一种内生型拮抗枯草芽孢杆菌，复配成新型生物型种衣剂。首先分别制备内生枯草芽孢杆菌悬浮液和木霉菌突变株发酵液，然后将十二烷基苯磺酸钠、羧甲基纤维素钠、罗丹明、水杨酸等助剂和无机离子与蒸馏水搅拌均匀配成助剂溶液，再将枯草芽孢杆菌悬浮液及木霉菌突变株发酵液依次加入到助剂溶液中并调节其中活性组分的浓度，得到所需的系统诱导黄瓜抗白粉病生物型种衣剂。这种含有诱导抗性功能的木霉菌突变株代谢物和活体内生枯草芽孢杆菌的种衣剂，具有寿命长、防效高、耐储存等优点，对黄瓜白粉病有很好的防治效果。

主权项

1、一种系统诱导黄瓜抗白粉病生物型种衣剂的制备方法，其特征在于包括如下具体步骤：1)将拮抗内生枯草芽孢杆菌B20-006接种于LB液体培养基中，25℃135转/分钟振荡培养4天，5000转/分离心5分钟，弃上清液，用无菌水洗涤沉淀，5000转/分下离心5分钟，弃上清液，洗涤后用无菌蒸馏水悬浮菌体，制得内生枯草芽孢杆菌悬浮液备用；2)将拮抗木霉菌突变株F3接种于PDA固体培养基上，25℃下培养6天，使菌落表面产生大量分生孢子，用无菌蒸馏水将孢子洗下，并配成浓度为3×107 个孢子/毫升的孢子悬浮液，在PDB液体培养基内培养，接菌量为每100毫升培养基接种5毫升孢子悬浮液，在141转/分、28℃的条件下发酵3天，然后过滤去除菌丝，得到木霉菌突变株发酵液；3)以重量百分比计，将0.5％-2.5％的十二烷基苯磺酸钠、1％-3％的羧甲基纤维素钠、0.5％-1.5％的罗丹明、0.005％-0.015％的水杨酸、0.5％-1.5％的K2HPO3、0.05％-0.15％的MgSO4、0.05％-0.15％的CaCO3、0.005％-0.015％的ZnSO4、0.005％-0.015％的四硼酸钾，依次加入到蒸馏水中，搅拌成均匀的黏稠状液体，配成助剂溶液；4)将内生枯草芽孢杆菌悬浮液及80-120毫升的木霉菌突变株发酵液依次加入到助剂溶液中，振荡混合均匀，调节拮抗枯草芽孢杆菌终浓度为1010菌落形成单位cfu/毫升，得到系统诱导黄瓜抗白粉病生物型种衣剂。