[发明专利]一种血红蛋白凝胶层析的方法

摘要

本发明公开了一种血红蛋白凝胶层析的方法，其步骤包括：1)凝胶的处理；2)装柱；3)平衡；4)血红蛋白样品的制备；5)层析柱还原层的形成；6)上样；7)洗脱；8)清洗；本发明的有益效果为：具有方便使血红蛋白分离纯化的优点。

主权项

1.一种血红蛋白凝胶层析的方法，其步骤为：a)凝胶的处理：取葡聚糖凝胶干粉，浸泡于蒸馏水中充分溶胀，然后倾斜法除去表面悬浮的小颗粒，最后加入等体积pH7磷酸缓冲液继续浸泡；b)装柱：将层析柱下端的止水螺丝旋紧，向柱中加入缓冲液，把溶胀好的糊状凝胶边搅拌边到入柱中，同时开启止水螺丝，控制一定的流速，使柱中的凝胶一直处在溶液中；c)平衡：用磷酸缓冲液洗脱，平衡20分钟；d)血红蛋白样品的制备：取若干抗凝血于烧杯中，加入磷酸缓冲液，再加入固体铁氰化钾，使浓度达到5mg/ml；e)层析柱还原层的形成：FeSO4于小烧杯中，加入Na2HPO4，Na2H2EDTA混合液搅拌均匀；待层析柱上缓冲液几乎全部进入凝胶时，速取适量混合液加入层析柱中，待混合液完全进入柱床后加入适量缓冲液；f)上样：将柱中多余的液体从底部流出后关闭止水螺丝，取前面制备好的血红蛋白样品适量，将样品溶液小心加到凝胶柱上，打开止水螺丝，使样品溶液流入柱内；g)洗脱：用缓冲液进行洗脱，控制缓冲液在约每5秒一滴的流速，观察并记录实验现象；h)清洗：待所有色带流出层析柱后，加快流速，继续清洗层析柱5min。