[发明专利]浸矿细菌－嗜铁钩端螺旋菌的选择性分离方法

摘要

浸矿细菌－嗜铁钩端螺旋菌的选择性分离方法，将样品采用9K液体培养基培养，经过四代富集培养后，采用稀释分离法或平板纯化分离法对菌株进行纯化培养，最后获得目标菌株即纯培养物。与双层平板技术相比，上述稀释分离法和平板分离法均不涉及嗜酸异养细菌－Acidiphilium SJH的加入，使得分离过程相对简单得多；本发明培养介质中较高的Fe³⁺/Fe²⁺比例即较高的氧化还原电位，对钩端螺旋菌的抑制作用较小；培养介质中较低的pH(≤1.4)和较高的温度(≥40℃)有利于钩端螺旋菌的生长；较低浓度的Al3+不但有利于嗜铁钩端螺旋菌对亚铁离子的生物氧化，而且还能促进嗜铁钩端螺旋菌。

主权项

1.浸矿细菌-嗜铁钩端螺旋菌的选择性分离方法，其特征在于：首先将样品接种到盛有9K液体培养基的容器中，培养基pH＝2.5，20-30g/lFeSO4·7H2O，将该容器置于30℃空气浴摇床中振荡，摇床转速为180rpm，当培养基颜色变成红色时，获得第一代培养富集物；将适量第一代富集物接种到上述9K液体培养基中，培养基中亚铁离子浓度为40-60g/l，pH＝2.5，温度30℃，当培养基颜色变成红色时，获得第二代培养富集物；将适量第二代富集物接种到9K液体培养基中，培养基中亚铁离子浓度为40-60g/l，pH＝1.6，温度为40℃，同时加入终浓度为5-10mM的Fe2(SO4)3，当培养基颜色变成红色时，获得第三代培养富集物；将适量第三代富集物接种到9K液体培养基中，培养基中亚铁离子浓度为40-60g/l，pH＝1.6，温度为40℃，同时加入终浓度为5-10mM的Fe2(SO4)3，加入终浓度为0.5-1.5mM的Al3+，当培养基颜色变成红色时，获得第四代培养富集物；将第四代富集物分别按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9稀释度，接种到9K液体培养基中培养，培养条件与第四代相同，选择最高稀释度的培养物按上述稀释过程重复三次，最后获得目标菌株即纯培养物。