[发明专利]一种pcrDNA疫苗及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种新型DNA疫苗——pcrDNA疫苗的制备原理和技术。pcrDNA疫苗是将携带有完整的基因表达元件的PCR产物直接作为DNA疫苗，该DNA疫苗不携带任何目的基因以外的无关基因或核酸序列，具有更好生物安全性；单位质量内具有更高的效价；该疫苗刺激产生的抗体较用质粒制备的DNA疫苗产生抗体更快；采用PCR技术制备DNA疫苗，工艺简单，便于大规模工业化生产。本发明还公开了上述pcrDNA疫苗在人和动物中的应用，pcrDNA疫苗免疫人和动物，可以起到预防和治疗人和动物的疾病如传染病、寄生虫病、肿瘤、营养代谢病及基因缺陷性疾病等及其他应用目的。

主权项

1、一种pcrDNA疫苗的制备方法，包括如下步骤：(1)通用载体pcrDNAV或通用载体pcrDNAV-T的构建：将扩增出的真核生物基因转录启动子和扩增出的真核生物基因转录终止信号序列分别克隆至克隆载体中，并保留克隆载体的多克隆位点，获得通用载体，该通用载体命名为pcrDNAV；或由pcrDNAV进一步制备通用载体T载体，命名为pcrDNAV-T；(2)通用载体pcrDNAV或pcrDNAV-T的通用引物的设计：分别在通用载体pcrDNAV或pcrDNAV-T上的真核生物基因转录启动子的上游和真核生物基因转录终止信号序列的下游设计通用引物，通用引物扩增后pcr产物包含完整的基因表达元件盒；(3)含有目的基因的重组pcrDNA疫苗通用载体的构建：将目的基因按基因克隆的方法克隆入pcrDNAV或pcrDNAV-T载体的多克隆位点中，获得含有目的基因的重组质粒pcrDNAV-Target或pcrDNAV-T-Target；(4)pcrDNA疫苗的扩增：以pcrDNAV-Target或pcrDNAV-T-Target为模板，通用引物为引物，采用PCR扩增出完整的含有目的基因的基因表达元件盒即含有完整基因表达盒的线性DNA片段，所述线性DNA片段即为pcrDNA疫苗。