[发明专利]一种高效快速分离人头皮毛囊中上皮细胞的方法

摘要

本发明公开一种毛囊上皮细胞的高效快速分离方法，该方法采用两步消化法消化头皮，即先用胶原酶I消化，再用胰酶消化，得到上皮细胞群并进行接种、培养。该方法对整块头皮进行批量处理，从中分离出毛囊上皮细胞，具有高效快速的显著效果。

主权项

1.一种高效快速分离人头皮毛囊中上皮细胞的方法，依次包括以下步骤：a.人头皮的处理：去除头皮外毛发以及皮下组织中的脂肪和结缔组织，制成0.3-0.5cm宽的皮条，先用2.5g/L的洗必泰溶液浸泡10-15min，再用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液震荡洗涤三次；b.酶消化法消化：除去表皮，破碎，在37℃下以100rpm速度搅拌并加入0.5％胶原酶I，搅拌2小时后悬液过800目筛，再用0.1mol/L的磷酸盐缓冲液过滤洗涤截留于筛网上的毛干，收集后在25℃下加入0.075％的胰酶静置20分钟；c.培养基的配制：在K-SFM培养基加入胎牛血清、胰岛素、氢化可的松和庆大霉素，使每毫升K-SFM培养基里含有：0.1ml胎牛血清、6ug胰岛素、0.5ug氢化可的松和40ug庆大霉素；d.将c步骤所得的培养基加入b步骤所得的溶液中，以1000rmp速度离心3次，每次离心5分钟，倒掉上清液，得到上皮细胞群；e.在培养器中预铺浓度为1％的I型胶原，再将步骤d所得到的上皮细胞群接种到培养器中培养便得。